18．1mol/L MgCl2溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解203.4g MgCl2·6H2O，用水定容至1L，分装成小份并高压灭菌备用。
【注意】
MgCl2极易潮解，应选购小瓶（如100g）试剂，启用新瓶后勿长期存放。
19．β-巯基乙醇（BME）溶液
【配制方法】
一般得到的是14.4mol/L溶液，应装在棕色瓶中保存于4℃。
【注意】
BME或含有BME的溶液不能高压处理。
20．NBT溶液
【配制方法】
把0.5g氯化氮蓝四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中，保存于4℃。
21．酚/氯仿溶液
【配制方法】
把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/L Tris·HCl(pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆盖等体积的0.01mol/l Tris·HCl(pH7.6)液层，保存于4℃。
【注意】
酚腐蚀性很强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜，穿防护服。所有操作均应在化学通风橱中进行。与酚接触过的部位皮肤应用大量的水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。
22．10mmol/L苯甲基磺酰氟（PMSF）溶液
【配制方法】
用异丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml（10mmol/L），分装成小份贮存于-20℃。如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液（100mmol/L）。
【注意】
PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。
PMSF在水溶液中不稳定。应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。pH值为8.0时，20μmmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节 为碱性（pH>8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。
23．磷酸盐缓冲溶液（PBS）溶液
【配制方法】
在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,用HCl调节 溶液的pH值至7.4加水定容至1L，在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌20min。保存于室温。
24．1mol/L乙酸钾（pH7.5）溶液
【配制方法】
将9.82g乙酸钾溶解于90ml纯水中，用2mol/L乙酸调节 pH值至7.5后加入纯水定容到1L，保存于-20℃。
25．乙酸钾溶液（用于碱裂解）
【配制方法】
在60ml 5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水，即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。
26．3mol/L乙酸钠（pH5.2和pH7.0）溶液
【配制方法】
在80ml水中溶解408.1g三水乙酸钠，用冰乙酸调节 pH值至5.2或用稀乙酸调节 pH值至7.0，加水定容到1L，分装后高压灭菌。
27．5mol/L NaCl溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解292.2g NaCl加水定容至1L，分装后高压灭菌。
28．10%十二烷基硫酸钠（SDS）溶液
【配制方法】
在900ml水中溶解100g电泳级SDS，加热至68℃助溶，加入几滴浓盐酸调节 溶液的pH值至7.2，加水定容至1L，分装备用。
【注意】
SDS的微细晶粒易扩散，因此称量时要戴面罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS，10%SDS溶液无须灭菌。
29．20×SSC溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解175.3g NaCl和88.2g柠檬酸钠，加入数滴10mol/l NaOH溶液调节 pH值至7.0，加水定容至1L，分装后高压灭菌。
30．20×SSPE溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解17.5g NaCl、27.6g NaH2PO4·H2O和7.4g EDTA，用NaOH溶液调节 pH值至7.4（约需6.5ml 10ml/L NaOH），加水定容至1L，分装后高压灭菌。
31．100%三氯乙酸溶液
【配制方法】
在装有500g TCA的瓶中加入227ml水，形成的溶液含有100%（M/V）TCA。
32．1mol/L Tris溶液
【配制方法】
在800ml水中溶解121.91g Tris碱，加入浓HCl调节 pH值至所需值。
pH HCl
7.4 70ml
7.6 60ml
8.0 42ml
应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值，加水定容至1L，分装后高压灭菌。
【注意】
如1mol/L溶液呈现黄色，应予丢弃并置备质量更好的Tris。
尽管多种类型的电极均不能准确测量Tris溶液的pH值，但仍可向大多数厂商购得合适的电极。
Tris溶液的pH值因温度而异，温度每升高1℃，pH值大约降低0.03个单位。例如：0.05mol/L的溶液在5℃、25℃、和37℃时的pH值分别为9.5、8.9和8.6。
33．Tris缓冲盐溶液（TBS）（25mmol/l Tris）
【配制方法】
在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl和3g Tris碱，加入0.015g酚并用HCl调至pH值至7.4，用蒸馏水定容至1L，分装后在151bf/in2(1.034×105Pa)高压下蒸汽灭菌20min，于室温保存。
34．X-gal溶液
【配制方法】
X-gal为5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷。用二基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/ml的贮存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中，装有X-gal溶液的试管须用铝箔封裹以防因受光照而被破坏，并应贮存于-20℃。X-gal溶液无须过滤除菌。
杂交试验中用于降低背景的封闭剂
试剂
用途 Denhardt试剂 Northern杂交 使用RNA探针的杂交 单拷贝序列的Southern杂交 将DNA固定于尼龙膜上的杂交 Denhardt试剂通常配制50×贮存液，过滤后保存于-20℃。可将该贮存液10倍稀释于预杂交液（常为含有0.5%SDS和100μg/ml经变性被打断的鲑精DNA的6×SSC或6×SSPE）中。50×Denhardt液中含5g聚蔗糖（Ficoll,400型，Pharmacia）、5g聚乙烯吡咯烷酮和5g牛血清白蛋白（组分V”Sigmal），加水至终体积为500ml。 BLOTTO Grunstein-Hogness杂交 Benton-Davis杂交 除单拷贝序列Southern杂交以外的所有Southern杂交 斑点印迹 1×BLOTT（牛乳转移技术优化液，Bovine Lacto Transfer Technique Optimizer）,是含5%胶脂奶粉和0.02%叠氮钠的水溶液，应保存于4℃。使用前可用预杂交液稀释25倍。BLOTTO不应与高浓度的SDS并用，因为后者会导致牛奶中蛋白质析出。如果杂交背景不合要求，可在杂交液中加入NP-40至终浓度为1%。BLOTTO不能用作Northern杂交的封闭剂，因为这一封闭剂中可能含有RNA酶，其活性之高使人无法接受。 注意：叠氮钠有毒性，取用时需戴手套小心操作。含叠氮钠的溶液应予明确标记。 肝素 Southern杂交 原位杂交 肝素（Sigma H-7005，从猪中提取的二级产品或相当等级的产品）用4×SSPE或4×SSC溶解配制成50mg/ml的浓度，保存于4℃。肝素在含有葡聚糖硫酸酯的杂交液中用作封闭剂的浓度为500μg/ml，在不含葡聚糖硫酸酯的杂交液中的浓度为50μg/ml。 经变性并被打断的鲑精DNA southern和Northern杂交 把鲑鱼精子DNA（Sigma,Ⅲ,盐钠）溶解于水配制成10mg/ml的浓度，必要时于室温磁力搅拌2～4h助溶。把溶液中NaCl的浓度调至0.1mol/L，并用酚和酚/氯仿各抽提一次，回收水相。合DNA溶液快速通17号皮下注射针头12次，以剪切DNA。加入2倍体积用冰预冷的乙醇沉淀DNA。离心回收DNA并重溶于水，配制成10mg/ml的浓度，测定溶液的OD260值并计算出精确的DNA浓度，然后煮沸10min，分装成小份保存于-20℃。使用前置沸水浴中加热5min，然后迅速在冰浴中骤冷。预杂交液中应含有100μg/ml经变性并被打断的鲑鱼精子DNA
六、常用凝胶的技术参数
1．葡聚糖凝胶的某些技术数据
种类
干颗粒直径（μ）
分子量分级范围
床体积毫升/克干分子筛
得水值 溶胀最少平衡时间（h）
柱头压力（kPa）(2.5cm直径柱) 肽及球形蛋白质 葡聚糖（线性分子） 室温 沸水浴 Sephadex G-10 40～ 120 ～700 ～700 2～ 3 1.0±0.1 3 1 Sephadex G-10 40～ 120 ～1500 1500 2.5～3.5 1.5±3.5 3 1 Sephadex G-25
粗级 100～300
(≈5～100目)
中级 50～150
(≈100～200目)
1,000～
5,000
100～
5,000
4～6
1.5±0.2
6
2
细级 20～800(≈200～400目)
超细 10～40 Sephadex G-50
粗级 100～200
中级 50～150 1,500～ 500～
细级 20～80 30,000 10,000 9～11 5.0±0.3 6 2
超细 10～40 Sephadex G-75 40～120 3,000～ 1,000～
超细 10～40 70,000 950,000 12～15 7.5±0.5
24
3
3.92～15.86 Sephadex G-100 40～120 4,000～ 1,000～
超细 10～40 1,500,000 150,000 15～20 10.0±1.0 48 5 2.35～9.41 Sephadex G-150 40～120 5,000～ 1,000～ 20～30
超细 10～40 400,000 150,000 18～22 15.0±1.5 72 5 0.88～3.53 Sephadex G-200 40～120 5000～ 1000～ 30～40 10～40 800,000 200,000 20～25 20.0±2.0 72 5 0.39～1.57
2.聚丙烯酰胺凝胶的技术数据
型号
排阻的下限
(分子量)
分级分离范围
(分子量)
膨胀后的床体积(ml/g干凝胶)
膨胀所需最少时间(室温,h) Bio-gel-P-2 1,600 200～2,000
3.8
2～4 Bio-gel-P-4 3,600 500～4,000
5.8
2～4 Bio-gel-P-6 4,600 1,000～5,000
8.8
2～4 Bio-gel-P-10 10,000 5,000～17,000
12.4
2～4 Bio-gel-P-30 30,000 20,000～50,000
14.9
10～12 Bio-gel-P-60 60,000 30,000～70,000
19.0
10～12 Bio-gel-P-100 100,000 40,000～100,000
19.0
24 Bio-gel-P-150 150,000 50,000~150,000
24.0
24 Bio-gel-P-200 200,000 80,000～200,000
34.0
48 Bio-gel-P-300 300,000 100～400,000
40.0
48
3．琼脂糖凝胶的技术数据
型号
琼脂糖含量
%（W/W）
排阻的下限
（分子量）
分级分离的范围（分子量）
生产厂家
Sepharose 4B
4
0.3×106～3×106
Pharmacia
Sepharose 2B
2
2×106～25×106
Sagavac 10
10
2.5×105
1×104～2.5×105
Seravac
Sagavac 8
8
7×105
2.5×104～7×105
Sagavac 6
6
2×106
5×104～2×106
Sagavac 4
4
15×106
2×105～15×106
Sagavac 2
2
150×106
5×105～15×107
Bio-gel A-0.5M
10
0.5×106
<1×104～0.5×106
Bio-Rad
Bio-gel A-1.5M
8
1.5×106
<1×104～1.5×106
Bio-gel A-5M
6
5×106
1×104～5×106
Bio-gel A-15M
4
15×106
4×104～15×106
Bio-gel A-50M
2
50×106
1×105～50×106
Bio-gel A-150M
1
150×106
1×106～150×106
4．各处凝胶所允许的最大操作压
凝胶
最大静水压（kPa）
Sephadex
G-10
9.8
G-15
9.8
G-25
9.8
G-50
9.8
G-75
4.9
5．琼脂糖凝胶浓度与线性DNA分辨范围
凝胶浓度（%）
线性DNA长度（bp）
0.5
1000～30000
0.7
800～12000
1.0
500～10000
1.2
400～7000
1.5
200～3000
2.0
50～2000
6．染料在变性聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速度
凝胶浓度（%）
溴酚蓝
二甲苯青FF
5．0
35bp
140bp
6．0
26bp
106bp
8．0
19bp
75bp
10．0
12bp
55bp
20．0
8bp
28bp
7．染料在非变性聚丙烯酰胺凝胶中的迁移速度
凝胶浓度（%）
溴酚蓝
二甲苯青FF
3.5
100bp
460bp
5.0
65bp
260bp
8.0
45bp
160bp
12.0
20bp
70bp
15.0
15bp
50bp
20.0
12bp
45bp
七、氨基酸的特性
氨基酸名称 三字母缩写 单字母缩写质量 侧链电离的pHa值
结构式
丙氨酸（alanine）
Ala
A
89.09
精氨酸（arginine）
Arg
R
174.2
12.48
