背景介绍：蛋白质提取是分子生物学研究中的基础步骤，尤其在免疫印迹（Western blot）等蛋白检测技术中具有重要意义。本文介绍一种从培养的人类单核细胞中快速提取未降解蛋白的方法，确保蛋白的完整性和活性，为后续的蛋白分析提供可靠样品。

操作流程：

首先，从Buffy Coat中分离出外周血单个核细胞（PBMCs），并利用抗CD14磁珠（参考Miltenyi Biotec的操作流程）选择纯化CD14+单核细胞。将单核细胞在RPMI培养基中加入10%的胎牛血清（FCS）和25ng/ml的人类巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF），以每孔400万细胞的密度在六孔培养板中培养过夜。

第二天，经过任何处理后，在收获前5分钟加入5微升的PefaBlock（罗氏公司生产的细胞透过性蛋白酶抑制剂），然后将培养板放在冰上冷却。吸出培养基后，立即加入150微升的含有蛋白酶抑制剂的SDS样品缓冲液（包括蛋白酶抑制剂混合物），操作时逐孔进行，避免蛋白在提取前发生快速的磷酸化或去磷酸化事件。用刮刀充分刮取细胞（约10-15秒），将提取物转移到离心管中，震荡几秒，离心9000 rpm离心2分钟，取上清液转移到新管中，煮沸5分钟。

最后，将15微升样品加载到Criterion（Bio-Rad）凝胶中，蛋白浓度约在30-50微克范围内，以进行后续的免疫检测。

注意事项：PefaBlock是一种细胞穿透性蛋白酶抑制剂，优于传统的PMSF，因为它可以穿透细胞膜，有效抑制细胞内的蛋白酶活性，保护蛋白不被降解。