背景介绍：

3T3-L1细胞是一种常用的成纤维细胞系，广泛应用于脂肪细胞分化及脂质代谢研究。通过特定的培养条件，3T3-L1细胞可以诱导分化为脂肪细胞，形成脂滴，是研究脂肪生成机制的重要体外模型。

细胞培养条件：

我们将3T3-L1细胞储存在150毫米的组织培养皿中，培养基采用含10%胎牛血清（FBS）、100单位/mL青霉素和100微克/mL链霉素的高糖DMEM（Gibco货号11995-065）。细胞每3-4天传代一次，比例为1:5，传代时确保细胞覆盖培养皿但不过度密集，以维持细胞的快速生长和分化潜能。正常维护下，细胞可传代至至少第12代。

分化诱导流程：

细胞培养7-8天后进入静止期，开始分化诱导。更换培养基为含10% FBS和抗生素的DMEM，添加4微克/mL胰岛素（Sigma货号I-5500）、115微克/mL 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤（IBMX，Sigma货号I-5879）及97.5纳克/mL地塞米松（Sigma货号D-1756）。诱导3天后，轻柔弃去诱导培养基，换用含血清和抗生素的DMEM培养基继续培养。通常在诱导后第4天即可观察到细胞内脂滴的积累，标志着脂肪细胞分化的开始。

注意事项：

分化初期（前5天），细胞单层结构非常脆弱，操作时应避免剧烈吸液或培养基添加，以防细胞层受损影响分化效果。