简介
细胞克隆形成存活率检测（Cell Clonogenic Survival Assay）是一种评估细胞在受到化学药剂或辐射损伤后，存活并具有增殖能力的实验技术。该方法广泛应用于肿瘤学、药物筛选以及辐射生物学研究中，旨在评估细胞的生存能力和修复机制。
操作流程
- 将细胞在培养基中培养至70%的融合度，然后用适当的化学药剂或辐射剂量处理细胞。实验中应设立未处理的对照组。
- 在预定时间点，用胰酶消化细胞并计数。
- 将1000个细胞重新接种到新的60mm或100mm培养皿中（每个条件重复），培养9天。在第5天加入新鲜培养基以维持细胞生长（详见提示1）。
- 第9天或当细胞集落生长到约50个细胞时，去除培养基，加入1ml（60mm培养皿）或2ml（100mm培养皿）的克隆形成试剂，室温孵育45分钟。
- 用PBS洗涤细胞两次，观察并计数蓝色的克隆集落。
- 计算存活率，采用公式：存活率（%）=（处理组平均克隆数/对照组平均克隆数）×100。
试剂配制
- 克隆形成试剂：50%乙醇与0.25%的1,9-二甲基-亚甲蓝（Sigma Aldrich，货号34,108-8）混合配制。
注意事项
提示1：低密度接种可能导致部分细胞难以粘附在培养皿上，建议使用Sarstedt的Cell Plus培养皿或用多聚赖氨酸处理培养皿以增强细胞粘附性。