背景介绍
疟疾是由疟原虫（Plasmodium spp.）引起的寄生虫病，严重威胁全球公共健康，尤其在热带和亚热带地区。开发和评估抗疟疾药物的有效性是控制疟疾传播的重要手段。体外全细胞药物筛选实验是评估候选药物抗疟疾活性的重要工具，其中 [H3] 次黄嘌呤摄取实验是一种经典的方法。
实验方法
以下是基于 [H3] 次黄嘌呤摄取的抗疟疾药物体外活性检测的详细步骤：
- 准备工作：在96孔板中分装25 μL完全RPMI培养基至各孔（每种药物浓度设置三个重复）。
- 药物处理：向每孔加入25 μL待测抗疟疾药物溶液，浓度范围为1-10 μM。
- 加入寄生红细胞：向每孔加入200 μL被疟原虫感染的红细胞（血细胞比容为1.7%）。
- 初步孵育：将96孔板置于37°C培养箱中孵育24小时。
- 加入放射性标记物：向每孔加入25 μL [H3] 次黄嘌呤（0.5 mCi）溶液。
- 二次孵育：继续在37°C下孵育18小时。
- 收集样本：使用MASH型收集器对培养板进行收集，并将滤纸条晾干后剪下，放入含有闪烁液的闪烁瓶中。
- 数据分析：使用液体闪烁计数器测量放射性活性，并通过计算机非线性回归分析（Rodhart等，1980）拟合浓度-反应数据至S型函数。
实验注意事项
- 在实验中需设置对照组，包括不含药物的对照孔以及未感染疟原虫的红细胞对照孔。
- 确保实验操作过程中无污染，所有实验器材需严格灭菌处理。
- 实验过程中需严格控制温度和时间，以保证实验结果的准确性和可重复性。
实验意义
该方法通过测量寄生红细胞摄取放射性标记次黄嘌呤的能力，间接反映候选药物对疟原虫的抑制效果。其高通量和高灵敏度特点使其成为抗疟疾药物筛选的重要工具。
参考文献
Rodhart et al., 1980. 非线性回归分析方法。