描述
本文介绍了一种通过双胸苷阻断法实现HeLa细胞在G1/S期边界（实际上是G1期）同步化的实验方法。该方法具有高效性，能够在培养物中实现几乎完全的细胞同步化。然而需要注意的是，该方法不适用于具有完整p53介导的细胞凋亡反应的细胞系。
实验步骤
- 在标准DMEM培养基（含10%胎牛血清FBS）中培养HeLa细胞，直至细胞密度达到约40%的汇合度。
- 将溶解于PBS中的胸苷加入培养基中，使其最终浓度达到2mM。
- 将培养物置于37℃环境中孵育19小时（需严格控制时间）。
- 移除培养基，用PBS清洗细胞3次。
- 加入不含胸苷的新鲜培养基，并在37℃下孵育9小时。
- 再次加入胸苷，使其最终浓度达到2mM，并在37℃下孵育16小时。
- 用PBS清洗细胞，加入新鲜培养基。此时，细胞已同步化至G1期，并将在接下来的15小时内被“释放”以继续进行细胞周期。细胞将在约1-2个细胞周期内保持同步，随后逐渐恢复为非同步状态。
实验配方
- 标准Gibco或Invitrogen品牌的DMEM培养基。
- 任意品牌的胎牛血清（FBS）。
- Sigma品牌的胸苷粉末。
实验耗材
- 标准组织培养耗材即可满足实验需求。
实验小贴士
- 在操作过程中，无需使用过滤吸头。