利用农杆菌介导法进行烟草转化是一种常见的植物基因工程技术。本文详细介绍了该方法的实验步骤。

实验步骤

1. 农杆菌培养与收获：
将农杆菌在YEP培养基中过夜培养，离心收集菌体，用MS液体培养基洗涤后，再用MS液体培养基稀释至原体积的1/10。

2. 烟草叶片消毒：
用70%乙醇处理45秒，随后用2.5%次氯酸钠处理12分钟，最后用无菌双蒸水洗涤3次。

3. 农杆菌接种：
将烟草叶片切成0.5cm²的小块，倒置于农杆菌溶液中浸染5分钟，然后置于无菌滤纸上，转移到MSO培养基上共培养48小时。

4-1. 农杆菌洗涤与芽诱导：
用含有BAP 1.0mg/L、NAA 0.1mg/L、Carbenicillin 500mg/L和Kanamycin 200mg/L的MS液体培养基洗涤3次，然后将叶片倒置于相应的MS固体培养基上。

4-2. 农杆菌洗涤与愈伤组织诱导：
用含有BAP 0.1mg/L、NAA 1.0mg/L、Carbenicillin 500mg/L和Kanamycin 200mg/L的MS液体培养基洗涤3次，然后将叶片倒置于相应的MS固体培养基上。

5.继代培养：
2周后，将材料转移到含有BAP 1.0mg/L、NAA 0.1mg/L和Kanamycin 100mg/L的MS培养基上继续培养。