人前列腺癌细胞系（如PC3、DU145、JCA1、ALVA31和LNCaP）的培养方法如下：

细胞的生长和传代

这些细胞可以在标准的RPMI完全培养基中培养。通常，在T75培养瓶中接种40万至50万个细胞，加入12 ml RPMI完全培养基，在37℃、7% CO₂（或5% CO₂）的条件下培养3至4天，当细胞达到约80%汇合度时进行传代。

传代时，用0.1%胰蛋白酶和0.04% EDTA（Sigma T-3924）处理细胞，使其从培养瓶表面脱落。然后，用RPMI培养基洗涤细胞一次，并将其重新接种到新的培养瓶中。

冻存细胞

将细胞悬浮在含有10% DMSO的FCS（HyClone SH30070.03）中，细胞密度约为200万个/ml。将1 ml细胞悬液分装到冻存管中，并将冻存管放入装有异丙醇的冻存容器中（例如Nalgene）。将冻存容器在-80℃冰箱中放置过夜，然后将冻存管转移到液氮中进行长期储存。

复苏冻存细胞

将解冻的细胞（约200万个）在RPMI完全培养基中洗涤一次，然后将所有细胞接种到12 ml RPMI培养基中，在T75培养瓶中培养。

标准RPMI完全培养基的配制

在500 ml RPMI-1640（GibcoBRL 11875-093）中添加：

5.0 ml青霉素（10,000 U）-链霉素（10 mg）-L-谷氨酰胺（200 mM）溶液（Sigma G-1146）

5.0 ml丙酮酸钠（100 mM，Sigma S-8636）

5.0 ml 1 M HEPES（pH 7.0）

0.5 ml 2-巯基乙醇溶液（50 mM，自制）

50 ml热灭活的胎牛血清（HyClone SH30070.03，在56℃下灭活40分钟）

2-ME溶液的配制

将50微升2-巯基乙醇加入14.2 ml无血清RPMI中，无菌过滤，分装后在-20℃保存。

稳定转染细胞筛选的抗生素浓度

表中列出了不同细胞系对应的抗生素浓度。括号中的数值表示在12 ml RPMI完全培养基中添加的抗生素储备液的体积，其中G418=遗传霉素储备液（10 mg/ml，Sigma G-1279），嘌呤霉素储备液（50 μg/ml，Sigma P-7255），潮霉素储备液（20 mg/ml，Calbiochem 400051）。