寡核苷酸标记是分子生物学实验中常见的一项技术，本文详细介绍了寡核苷酸标记的具体操作步骤。

实验步骤

1. 在微离心管中混合以下试剂：0.5 μL 变性缓冲液、50 ng 待标记的寡核苷酸（在 TE 缓冲液中）、用无水去离子水将总反应体积调整至 5 μL。

2. 将反应混合物在 70℃ 下孵育 5 分钟。

3. 将反应混合物置于冰上，并短暂离心以去除管盖上的冷凝水。

4. 按以下顺序向反应管中加入试剂：1.25 μL 10X 激酶缓冲液、0.5 μL 100 mM DTT、5 μL 10 uCi/μL [32P]ATP（注意！请参阅提示 #1）、0.75 μL（7.5 单位）T4 多核苷酸激酶。

5. 将反应混合物在 37℃ 下孵育 1 小时。

6. 向反应管中加入以下试剂：36 μL TE 缓冲液、50 μL 4.0 M 醋酸铵、1 μL 10 mg/ml tRNA、200 μL 100% 乙醇，涡旋混匀。

7. 以最大速度离心 10 分钟，使 DNA 沉淀。

8. 去除上清液，用 100 μL TE 缓冲液悬浮沉淀，取 1 μL 在闪烁计数器中用闪烁液计数（请参阅提示 #2）。

试剂配方

tRNA (10 mg/ml)、4.0 M 醋酸铵、TE 缓冲液（10 mM Tris, 1 mM EDTA, pH 8.0）、[32P]ATP (10 μCi/μL)、100 mM DTT、激酶缓冲液（10X，50% (v/v) 甘油，100 mM MgCl2，500 mM Tris, pH 9.5）、变性缓冲液（200 mM Tris, pH 9.5，1 mM EDTA，10 mM 精胺）。

注意事项

1. 注意！[32P]ATP 是一种生物危害物质，请查阅其 MSDS 以获取正确的处理说明。

2. DNA 沉淀无需用 70% 乙醇洗涤。