本协议用于测量代谢标记过程中35S-半胱氨酸在细胞蛋白中掺入的量。该协议可有效减少非特异性计数，这在使用标记的半胱氨酸时可能相当可观。在开始本协议之前，需要制备蛋白提取物。

操作步骤

1. 将10 μL放射性标记的蛋白提取物加入70 μL尿素溶液中。

2. 100°C孵育2分钟。

3. 加入20 μL 1 M碘乙酸。

4. 37°C孵育30分钟。

5. 加入2 μL 2-巯基乙醇。

6. 将10 μL转移到新的微量离心管中，加入1 mL 10% TCA。

7. 100°C孵育10分钟。

8. 使用真空吸滤装置将沉淀收集到Whatman玻璃微纤维GF/C滤膜上。

9. 用5 mL 5% TCA清洗滤膜3次。

10. 将滤膜转移到闪烁瓶中。

11. 加入500 μL Protosol。

12. 55°C孵育1小时。

13. 加入10 mL闪烁液。

14. 使用闪烁计数器计数样本。

试剂配方

5% (v/v) TCA

10% (v/v) TCA

100% TCA 母液：将500 g三氯乙酸溶解于227 mL ddH2O中

1 M 碘乙酸：新鲜配制

尿素溶液：10 M 尿素，0.5% (v/v) 2-巯基乙醇