本文介绍了一种检测完整细胞对糖脂特异性粘附的实验方法。该方法通过以下步骤实现：(1) 糖脂共轭物的高效薄层色谱（HPTLC）分析，(2) 用聚合物涂布色谱图，(3) 预阻断色谱图以减少非特异性细胞结合，(4) 将色谱图安装在丙烯酸酯腔室中，(5) 加入标记细胞，(6) 孵育，(7) 通过离心去除非粘附细胞，以及 (8) 固定粘附细胞以供检测。 粘附细胞在固定前不会通过气/液界面，因此即使粘附强度较低，也能检测到特异性细胞粘附。

实验步骤如下：

1. 将预切割的10 x 10 cm HPTLC板沿一条切割线断开，生成5 cm x 10 cm的板。将糖脂施加到板上，并使用标准程序进行TLC显色。随后彻底干燥色谱图（50°C，1小时）并冷却，然后进行聚合物涂布。

2. 制备聚异丁基甲丙烯酸酯（PIBM）溶液：将PIBM以10%（w/v）浓度溶解在氯仿中，然后以1:100比例稀释到快速搅拌的己烷中，得到1 mg/ml的储备溶液，可室温保存。使用前进一步用己烷稀释至最终浓度2-200 μg/ml（取决于细胞类型）。将显色并干燥的TLC板依次浸入己烷和PIBM溶液中各30秒，然后风干。

3. 将PIBM涂布的板浸入培养基中湿润，然后转移到含0.5 mg/ml BSA的阻断剂培养基中30分钟，再转移到无阻断剂的培养基中。

4. 将预阻断的板吸附面朝下放置在粘附腔室的间隔器上。向TLC板背面加培养基，并安装橡胶垫圈，确保板与垫圈接触区域无气泡。用螺丝固定垫圈和丙烯酸酯盖。

5. 通过腔室末端的路尔锁开口排除任何被困的培养基。将细胞悬液（105-106 cells/ml）加入到其中一个开口，直到腔室充满且无气泡（腔室容量15 ml）。用路尔锁密封开口，并将密封盒放置在微孔板离心机载体上，以30xg离心3分钟，使细胞与TLC板表面接触。

6. 将腔室（吸附面向上）浸入37°C的水浴中30分钟，以允许细胞粘附。

7. 从水浴中取出腔室，倒置后放入离心机载体中，以250-500xg离心10分钟（4°C），去除TLC板表面非粘附细胞。

8. 仍保持倒置，将腔室完全浸入冰冷的PBS中，去除盖子和垫圈，轻轻取出TLC板，在浸没状态下将其正置，放入转移皿中。使用充满液体的转移皿将TLC板依次转移到两个150 mm培养皿中进行PBS洗涤。

9. 在转移皿中，将板放置在空的150 mm培养皿中，轻轻覆盖100-150 ml的2%戊二醛PBS溶液，室温下固定30分钟。

10. 从转移皿中取出TLC板，用PBS浸洗，垂直放置干燥。

11. 将彻底干燥的板放置在X光片上曝光1-24小时，然后显影以检测粘附细胞的位置。