背景介绍
细胞周期的调控是细胞生物学研究的重要内容，特别是在细胞增殖、肿瘤研究以及药物筛选中具有重要意义。通过化学药物或染料实现细胞的同步，能够帮助研究者分析特定细胞周期阶段的生物学特性。Hoechst 33342是一种常用的DNA染料，广泛应用于细胞染色和细胞周期分析中。
操作流程
- 预同步细胞：将细胞在血清饥饿条件下培养，抑制其进入细胞周期，达到G0期状态。具体操作为在70%融合度时加入低血清培养基，培养2天。
- 细胞复苏：用含有4 g/ml阿佛地酰（Aphidicolin，DNA聚合酶抑制剂）的完全培养基刺激细胞重新进入细胞周期，培养14小时。或者，将指数生长期的细胞加入阿佛地酰，培养24小时，以阻滞在特定周期。
- 染色与同步：去除阿佛地酰，洗涤细胞，用含有Hoechst 33342的完全培养基培养12小时。此步骤的时间需根据不同细胞系进行优化，以确保细胞在G2期同步。
- 验证同步：用碘化丙啶（Propidium Iodide）染色结合流式细胞仪分析，确认细胞在G2期的比例。
所需试剂与配方
- 含Hoechst 33342的完全培养基：Dulbecco改良Eagle培养基（DMEM），加入0.5-1 g/ml Hoechst 33342（需根据细胞系优化），以及100 U/ml青霉素、100 μg/ml链霉素和10%（v/v）胎牛血清。
- 含阿佛地酰的完全培养基：DMEM，加入4 g/ml阿佛地酰，青霉素、链霉素及胎牛血清。
- 低血清培养基：含20 mM HEPES缓冲液、0.5%胎牛血清、青霉素、链霉素和DMEM基础培养基。
- PBS缓冲液：pH7.2，含2.7 mM氯化钾、4.3 mM磷酸二氢钠、1.8 mM一水磷酸钾和137 mM氯化钠。
注意事项
阿佛地酰和Hoechst 33342的浓度及作用时间需根据不同细胞系进行优化，因细胞类型差异可能影响同步效果。不同细胞系对培养基的要求也不同，应根据具体情况调整。