背景与意义

细胞周期同步是细胞生物学研究中的重要技术，能够帮助科学家在特定周期阶段分析细胞的分子机制。双胸苷阻断法是一种经典且高效的同步方法，常用于HeLa等细胞系，将细胞同步于G1/S期边界，有助于研究细胞周期调控、DNA复制与修复等过程。需要注意的是，该方法不适用于具有完整p53介导凋亡反应的细胞系。

操作流程

1. 将HeLa细胞在标准DMEM培养基（含10%胎牛血清）中培养至约40%汇合度。
2. 向培养基中加入已用PBS溶解的胸苷，使终浓度达到2mM。
3. 在37℃条件下孵育19小时，严格控制时间。
4. 移除培养基，用PBS清洗细胞3次。
5. 加入新鲜无胸苷的培养基，继续在37℃孵育9小时。
6. 再次加入胸苷至2mM，继续孵育16小时。
7. 用PBS清洗细胞，加入新鲜培养基。此时细胞已同步于G1期，随后将在15小时内释放并进入细胞周期。同步状态可持续1-2次细胞分裂，之后细胞将恢复异步生长。

实验材料

标准Gibco或Invitrogen DMEM培养基、任意品牌胎牛血清（FBS）、Sigma胸苷粉末、常规细胞培养耗材。

操作提示

无需使用滤芯移液器。