描述

农杆菌介导的烟草转化技术是一种常用的植物基因转化方法，广泛应用于植物遗传工程中。

步骤

1. 农杆菌培养与收获：

在YEP培养基中培养农杆菌过夜，浓度达到5000pm后，用MS培养基洗涤，并以1/10的原体积用MS培养基稀释。

2. 烟草叶片消毒：

用70%的乙醇处理45秒，再用2.5%的次氯酸钠处理12分钟，最后用无菌去离子水洗涤3次。

3. 农杆菌接种：

将0.5cm²的烟草叶片倒置，接种农杆菌溶液，使用无菌滤纸吸收多余的溶液。

4-1. 农杆菌洗涤与芽诱导：

使用含有1.0mg/L BAP、0.1mg/L NAA、500mg/L 卡那霉素和200mg/L 青霉素的MS培养基进行洗涤3次，然后将叶片倒置在上述固体MS培养基上。

4-2. 农杆菌洗涤与愈伤组织诱导：

使用含有0.1mg/L BAP、1.0mg/L NAA、500mg/L 卡那霉素和200mg/L 青霉素的MS培养基进行洗涤3次，然后将叶片倒置在上述固体MS培养基上。

5. 传代培养：

经过2周后，将植物材料转移到含有1.0mg/L BAP、0.1mg/L NAA和100mg/L 卡那霉素的MS培养基中进行传代培养。