
RBP3基因的MspI多态性是一种常用于研究人类视网膜结合蛋白基因多态性的方法。该多态性位于第1内含子的3'端附近,影响基因的表达和功能,可能与某些视网膜疾病相关。
检测步骤:
1. 样本准备:提取100-200纳克的基因组DNA,反应体积为25微升。
2. 引物设计:使用特异性引物进行PCR扩增:
- 引物1(RBP3MSP3):5'-CTG TAA GAG TTG GAG GT-3'
- 引物2(RBP3MSP1):5'-GTG CTT CAG TTT TTC CAT GG-3'
3. PCR反应体系:dNTP浓度为200微摩尔,缓冲液中含有1.5毫摩尔的MgCl₂、50毫摩尔的KCl和10毫摩尔的Tris-HCl(pH 8.4),Taq DNA聚合酶0.5单位。
4. PCR程序:预变性95°C 5分钟;循环30次:95°C 30秒,58°C 30秒,72°C 1分钟;终点72°C 10分钟。
5. 产物分析:用MspI酶切,未多态的样本显示515 bp的片段,存在多态性时显示394 bp和121 bp的片段(纯合子多态性存在)。
该检测方法由Wu和Nickerson于1991年报道,具体参考文献:Nucleic Acids Research 19:4016。