描述

农杆菌vir基因诱导方案是植物遗传转化中的关键步骤。农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）通过其Ti质粒上的vir基因（毒性基因）介导T-DNA转移至植物基因组。本方案详细描述了通过乙酰丁香酮（acetosyringone）诱导vir基因表达的标准操作流程，适用于瞬时转化或稳定转化实验。

实验步骤

1. 将农杆菌在30°C下，于5 ml富含营养的培养基（如LB或YEP）中过夜培养，培养基需添加适当抗生素。

2. 取约0.5 ml培养物，稀释至50 ml AB-蔗糖基本培养基中，添加适当抗生素。30°C过夜培养至细菌处于对数生长后期（使用Klett-Somerson分光光度计，红色滤光片，Klett值=100）。

3. 离心收集细菌。用两倍体积的诱导培养基重悬，诱导培养基含100 μM乙酰丁香酮。在室温（非30°C）下非常缓慢地振荡14-24小时。

4. 离心收集细菌。用MS植物组织培养基重悬。接种植物。

5. 两天后，用含100 μg/ml特美汀（timentin）的培养基冲洗植物组织。继续在含特美汀的固化培养基上培养组织。

6. 在不同时间点（2-10天）用X-gluc对组织进行染色，检测GUS报告基因表达。

配方

AB培养基：

20× AB缓冲液：K2HPO4 60 g/L，NaH2PO4 20 g/L。单独高压灭菌。

20× AB盐：NH4Cl 20 g/L，MgSO4·7H2O 6 g/L，KCl 3 g/L，CaCl2 0.2 g/L，FeSO4·7H2O 50 mg/L。调pH至7后高压灭菌。

将50 ml AB缓冲液和50 ml AB盐与900 ml蔗糖水混合（最终蔗糖浓度为0.5%）。

诱导培养基：1× AB盐，2 mM NaPO4，50 mM MES（pH 5.6），0.5%葡萄糖，100 μM乙酰丁香酮。

耗材

（原文未提供具体耗材列表，建议根据实验需要准备：无菌培养皿、离心管、分光光度计等。）

提示

（原文未提供提示，建议：乙酰丁香酮需避光保存；诱导时温度不宜超过30°C，以免vir基因表达受抑制；植物组织共培养后需充分清洗以去除农杆菌。）