本文汇总了分子生物学和生物化学实验中常用的技术参数，包括核酸与蛋白质的物理常数、缓冲液配制、酶溶液、抗生素、凝胶技术等，为实验室操作提供参考。

一、核酸及蛋白质常用数据

1. 核苷三磷酸的物理常数

核苷三磷酸（NTP）和脱氧核苷三磷酸（dNTP）在pH 7.0下的最大吸收波长（λmax）和摩尔消光系数是定量分析的基础。例如，ATP在259 nm处的摩尔消光系数为15400 L/(mol·cm)，OD280/OD260比值为0.15。这些数据用于计算核酸浓度。

2. 常用核酸的长度与分子量

λDNA（48502 bp）分子量约3.0×10^7 Da，pBR322质粒（4363 bp）约2.8×10^6 Da。rRNA和tRNA的分子量也列出，用于凝胶电泳标记。

3. 常用核酸蛋白换算数据

1 A260双链DNA = 50 μg/ml，1 A260单链RNA = 40 μg/ml。DNA摩尔换算：1 μg 100 bp DNA = 1.52 pmol。蛋白质/DNA换算：1 kb DNA编码333个氨基酸，对应约3.7×10^4 Da蛋白质。

4. 常用蛋白质分子量标准参照物

高分子量标准包括肌球蛋白（212 kDa）、β-半乳糖苷酶（116 kDa）等；中分子量包括磷酸化酶B（97.4 kDa）、牛血清白蛋白（66.2 kDa）等；低分子量包括碳酸酐酶（31 kDa）、溶菌酶（14.4 kDa）等。

5. 常用DNA分子量标准参照物

λDNA/HindIII、λDNA/EcoRI、pBR322/HaeIII等酶切片段大小列表，用于琼脂糖凝胶电泳分子量标记。

二、常用缓冲液

1. 分子克隆常用缓冲液

包括Tris-乙酸（TAE）、Tris-磷酸（TPE）、Tris-硼酸（TBE）等电泳缓冲液，以及SDS凝胶加样缓冲液。TBE长时间存放易沉淀，建议室温保存5×贮存液。

2. 磷酸缓冲液

0.1 mol/L磷酸钾缓冲液（pH 5.8-8.0）和磷酸钠缓冲液（pH 5.8-8.0）的配制方法，基于Henderson-Hasselbalch方程计算pH。

3. 电泳缓冲液

测序凝胶加样缓冲液含98%去离子甲酰胺、10 mmol/L EDTA、0.025%二甲苯青FF和溴酚蓝。甲酰胺需去离子处理。

4. 凝胶加样缓冲液

6×缓冲液类型包括溴酚蓝/二甲苯青FF/蔗糖、聚蔗糖、甘油等。溴酚蓝在琼脂糖中迁移速率相当于300 bp DNA，二甲苯青FF相当于4 kb DNA。

5. 各种pH值的Tris缓冲液的配制

0.05 mol/L Tris-HCl缓冲液（pH 7.1-8.9）的配制，以及温度对pH的影响（4℃、25℃、37℃）。常用缓冲液pKa值：Tris 8.08，HEPES 7.47，MOPS 7.15，PIPES 6.76，MES 6.09。

6. 温度对常用缓冲液pH的影响

列出Mes、Ada、PIPES等缓冲液的pKa(20℃)和ΔpKa/10℃。

三、常用酶的配制

1. 溶菌酶：50 mg/ml水溶液，-20℃保存。

2. 蛋白水解酶类：链霉蛋白酶（20 mg/ml，-20℃）需自消化去除核酸酶；蛋白酶K（20 mg/ml，-20℃）在含EDTA缓冲液中活性稳定，但消化角蛋白需加Ca²⁺。

3. 无DNA酶的RNA酶：胰RNA酶A（10 mg/ml）在100℃加热15 min灭活DNA酶，-20℃保存。

四、常用抗生素溶液

氨苄青霉素（50 mg/ml，水溶，-20℃），工作浓度20-60 μg/ml；氯霉素（34 mg/ml，乙醇溶，-20℃），工作浓度25-170 μg/ml；四环素（5 mg/ml，乙醇溶，-20℃），工作浓度10-50 μg/ml，注意镁离子拮抗。

五、常用贮存液的配制

包括30%丙烯酰胺（29:1，神经毒性，需戴手套）、40%丙烯酰胺（DNA测序用）、放线菌素D（致畸，避光）、ATP（0.1 mol/L，pH 7.0）、过硫酸铵（10%，4℃保存数周）、BCIP（0.5 g/10 ml DMF）、BES缓冲盐（2×，pH 6.96）、CaCl₂（1 mol/L，用于感受态细胞）、DTT（1 mol/L，不能高压）、dNTP（50 mmol/L，-70℃）、EDTA（0.5 mol/L，pH 8.0）、溴化乙锭（10 mg/ml，强诱变剂）、HEPES缓冲盐（2×，pH 7.05）、IPTG（0.2 g/ml，-20℃）、乙酸镁（1 mol/L）、MgCl₂（1 mol/L，易潮解）、β-巯基乙醇（14.4 mol/L，不能高压）、NBT（0.5 g/10 ml 70% DMF）、酚/氯仿（等体积混合，腐蚀性）、PMSF（10 mmol/L，异丙醇溶，剧毒，水溶液不稳定）、PBS（pH 7.4，高压灭菌）、乙酸钾（1 mol/L，pH 7.5）、乙酸钾（碱裂解用，3 mol/L K⁺，5 mol/L Ac⁻）、乙酸钠（3 mol/L，pH 5.2或7.0）、NaCl（5 mol/L）、SDS（10%，pH 7.2，微细晶粒易扩散）、SSC（20×，pH 7.0）、SSPE（20×，pH 7.4）、三氯乙酸（100%）、Tris（1 mol/L，pH 7.4-8.0，温度影响pH）、TBS（25 mmol/L Tris，pH 7.4）、X-gal（20 mg/ml，DMF溶，避光）。

杂交试验中用于降低背景的封闭剂

Denhardt试剂（50×，含聚蔗糖、PVP、BSA），用于Northern和Southern杂交；BLOTTO（5%脱脂奶粉，含叠氮钠，不能用于Northern杂交）；肝素（50 mg/ml，4℃保存）；鲑精DNA（10 mg/ml，剪切变性后使用）。

六、常用凝胶的技术参数

1. 葡聚糖凝胶的某些技术数据

Sephadex G-10至G-50的颗粒直径、分子量分级范围、床体积、得水值、平衡时间和柱头压力。例如，G-25粗级（100-300 μm）分级范围1000-5000 Da，床体积4-6 ml/g干胶。