瑞典乌普萨拉大学的研究人员近日开发出一种新方法，用于原位检测单个mRNA分子中的基因突变。这种方法能够协助鉴定肿瘤细胞中的变异，相关成果已发表在《Nature Methods》杂志上。

在传统的群体细胞分析中，稀有细胞中的分子可能因稀释效应而逃脱检测，且无法确定检测到的分子具体来源于哪些细胞。单细胞中mRNA分子的表达水平可能与群体平均值存在显著差异，因此单细胞研究对于解析转录本中的序列差异至关重要。荧光原位杂交（FISH）虽能原位检测单个mRNA分子，但其分辨率不足以区分高度相似的序列，限制了其在等位基因失活和剪接变体研究中的应用。

作为PCR和杂交方法的替代方案，锁式探针（padlock probe）多年来被用于核酸分析。这些高选择性探针通过靶点依赖的连接反应形成环状分子，随后利用滚环扩增（RCA）原位扩增，提供单细胞水平上靶分子的定位信息。RNA分子也可作为锁式探针连接的模板，但RNA的原位检测比DNA更具挑战性。

为此，乌普萨拉大学遗传学和病理学系的Mats Nilsson团队首先将mRNA逆转录为cDNA，再结合锁式探针和RCA进行检测，实现了转录本的原位检测。该方法能够鉴定多个基因中的单个突变，对于混合了正常细胞和癌细胞的肿瘤分析尤为重要。

研究人员认为，这一方法对多种疾病的诊断检测开发具有重大突破意义，能够在包含多种细胞类型的组织样本中研究基因变异的影响。Nilsson团队计划进一步优化该方法，以实现多个分子的同时检测，并分析生物银行样本。