由福建省农业科学院生物技术研究所承担的省科技计划项目“转基因水稻的快速检测技术研究”已通过省科技厅组织的专家验收。该项目针对转基因水稻的快速检测需求,系统开展了抗体与试纸条技术研究,取得了重要成果。
项目选取了BT类抗虫基因cry1Ac、cry1Ca、cry30FAa1,以及豇豆胰蛋白酶抑制剂基因cpti与潮霉素磷酸转移酶标记基因hpt,构建细菌表达载体并纯化目的蛋白,成功制备了Cry1Ac、Cry1Ca、Hpt、CPTI蛋白的多克隆抗体,以及Cry1Ab、Cry1Ac、Hpt蛋白的单克隆抗体。
研究建立了胶体金标记检测试纸条技术体系,对试纸条制备中的关键参数如胶体金颗粒大小、标记蛋白最适用量与pH值、膜材选择、试纸条规格、包被液与重悬液组分等进行了优化,探索出最佳制备工艺,制备了Cry1Ac、Cry1Ca与CPTI的转基因检测试纸条,并制订了中试生产技术资料与检测说明书。
利用该技术制备的胶体金试纸条检测转cry1Ac与cpti基因水稻植株,与ELISA结果比较显示:Cry1Ac试纸条灵敏度为96.0%,特异性为100%,符合率为96.1%;CPTI试纸条灵敏度为91.8%,特异性为94.8%,符合率为93.0%。该技术为转基因水稻选育过程中的快速检测提供了可靠工具,具有重要的应用价值。