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实验室常用缓冲液配方

2026-05-06 17:21 admin 本站原创 阅读 0
核心摘要： 实验室常用缓冲液配方是生物化学和分子生物学实验中的关键要素。缓冲液用于维持pH稳定，确保酶促反应和蛋白质稳定。常见缓冲液包括PBS、Tris-HCl和HEPES，其配方涉及精确的化学成分和浓度配

常用缓冲溶液的配制方法

  1. 1． 甘氨酸–盐酸缓冲液（0.05mol/L）

X毫升0.2 mol/L甘氨酸+Y毫升0.2 mol/L HCI，再加水稀释至200毫升

pH X Y pH X Y
2.0
2.4
2.6
2.8		 50
50
50
50		 44.0
32.4
24.2
16.8		 3.0
3.2
3.4
3.6		 50
50
50
50		 11.4
8.2
6.4
5.0

甘氨酸分子量 = 75.07，0.2 mol/L甘氨酸溶液含15.01克/升。
 
2．邻苯二甲酸–盐酸缓冲液（0.05 mol/L）
X毫升0.2 mol/L邻苯二甲酸氢钾 + 0.2 mol/L HCl，再加水稀释到20毫升

pH(20℃) X Y pH(20℃) X Y
2.2
2.4
2.6
2.8
3.0		 5
5
5
5
5		 4.070
3.960
3.295
2.642
2.022		 3.2
3.4
3.6
3.8		 5
5
5
5		 1.470
0.990
0.597
0.263

邻苯二甲酸氢钾分子量 = 204.23，0.2 mol/L邻苯二甲酸氢溶液含40.85克/升
 
3．磷酸氢二钠–柠檬酸缓冲液

pH 0.2mol/L Na2HPO4
（毫升）		 0.1mol/L
柠檬酸
（毫升）		 pH 0.2mol/L Na2HPO4
 （毫升）		 0.1mol/L
柠檬酸
（毫升）
2.2
2.4
2.6
2.8
3.0
3.2
3.4
3.6
3.8
4.0
4.2
4.4
4.6
4.8
5.0		 0.40
1.24
2.18
3.17
4.11
4.94
5.70
6.44
7.10
7.71
8.28
8.82
9.35
9.86
10.30		 10.60
18.76
17.82
16.83
15.89
15.06
14.30
13.56
12.90
12.29
11.72
11.18
10.65
10.14
9.70		 5.2
5.4
5.6
5.8
6.0
6.2
6.4
6.6
6.8
7.0
7.2
7.4
7.6
7.8
8.0		 10.72
11.15
11.60
12.09
12.63
13.22
13.85
14.55
15.45
16.47
17.39
18.17
18.73
19.15
19.45		 9.28
8.85
8.40
7.91
7.37
6.78
6.15
5.45
4.55
3.53
2.61
1.83
1.27
0.85
0.55

Na2HPO4分子量 = 14.98，0.2 mol/L溶液为28.40克/升。
Na2HPO4-2H2O分子量 = 178.05，0.2 mol/L溶液含35.01克/升。
C4H2O7·H2O分子量 = 210.14，0.1 mol/L溶液为21.01克/升。
 
4．柠檬酸–氢氧化钠-盐酸缓冲液

pH 钠离子浓度
（mol/L）		 柠檬酸（克）
C6H8O7·H2O		 氢氧化钠(克)
NaOH 97%		 盐酸（毫升）
HCl（浓）		 最终体积（升）①
2.2
3.1
3.3
4.3
5.3
5.8
6.5		 0.20
0.20
0.20
0.20
0.35
0.45
0.38		 210
210
210
210
245
285
266		 84
83
83
83
144
186
156		 160
116
106
45
68
105
126		 10
10
10
10
10
10
10
  • ①     使用时可以每升中加入1克克酚，若最后pH值有变化，再用少量50% 氢氧化钠溶液或浓盐酸调节，冰箱保存。
  • ②      

5．柠檬酸–柠檬酸钠缓冲液（0.1 mol/L）

pH
  1. 0.1   mol/L
柠檬酸
（毫升）
  1. 0.1   mol/L
柠檬酸钠
（毫升）		 pH
  1. 0.1   mol/L
柠檬酸
（毫升）
  1. 0.1   mol/L
柠檬酸钠
（毫升）
3.0
3.2
3.4
3.6
3.8
4.0
4.2
4.4
4.6
4.8		 18.6
17.2
16.0
14.9
14.0
13.1
12.3
11.4
10.3
9.2		 1.4
2.8
4.0
5.1
6.0
6.9
7.7
8.6
9.7
10.8		 5.0
5.2
5.4
5.6
5.8
6.0
6.2
6.4
6.6		 8.2
7.3
6.4
5.5
4.7
3.8
2.8
2.0
1.4		 11.8
12.7
13.6
14.5
15.3
16.2
17.2
18.0
18.6

柠檬酸C6H8O7·H2O：分子量210.14，0.1 mol/L溶液为21.01克/升。
柠檬酸钠Na3 C6H5O7·2H2O：分子量294.12，0.1 mol/L溶液为29.41克/毫升。
 
6．乙酸–乙酸钠缓冲液（0.2 mol/L）

 
pH(18℃)
  1. 0.2   mol/L
  NaAc
(毫升)
  1. 0.3   mol/L
 HAc
(毫升)		  
pH(18℃)
  1. 0.2   mol/L
NaAc
(毫升)
  1. 0.3   mol/L
HAc
(毫升)
2.6
3.8
4.0
4.2
4.4
4.6		 0.75
1.20
1.80
2.65
3.70
4.90		 9.25
8.80
8.20
7.35
6.30
5.10		 4.8
5.0
5.2
5.4
5.6
5.8		 5.90
7.00
7.90
8.60
9.10
9.40		 4.10
3.00
2.10
1.40
0.90
0.60

Na2Ac·3H2O分子量 = 136.09，0.2 mol/L溶液为27.22克/升。
 
7．磷酸盐缓冲液
（1）磷酸氢二钠–磷酸二氢钠缓冲液（0.2）

 
pH
  1. 0.2   mol/L
 Na2HPO4
(毫升)
  1. 0.3   mol/L
 NaH2PO4
(毫升)		  
pH
  1. 0.2   mol/L
Na2HPO4
(毫升)
  1. 0.3   mol/L
 NaH2PO4
(毫升)
5.8
5.9
6.0
6.1
6.2
6.3
6.4
6.5
6.6
6.7
6.8
6.9		 8.0
10.0
12.3
15.0
18.5
22.5
26.5
31.5
37.5
43.5
49.5
55.0		 92.0
90.0
87.7
85.0
81.5
77.5
73.5
68.5
62.5
  56.5
51.0
45.0		 7.0
7.1
7.2
7.3
7.4
7.5
7.6
7.7
7.8
7.9
8.0		 61.0
67.0
72.0
77.0
81.0
84.0
87.0
89.5
91.5
93.0
94.7		 39.0
33.0
28.0
23.0
19.0
16.0
13.0
10.5
8.5
7.0
5.3

Na2HPO4·2H2O分子量 = 178.05，0.2 mol/L溶液为85.61克/升。
Na2HPO4·2H2O分子量 = 358.22，0.2 mol/L溶液为71.64克/升。
Na2HPO4·2H2O分子量 = 156.03，0.2 mol/L溶液为31.21克/升。
（2）磷酸氢二钠–磷酸二氢钾缓冲液（1/15 mol/L）

pH mol/L/15Na2HPO4
(毫升)		 mol/L//15KH2PO4
(毫升)		 pH mol/L//15Na2HPO4
(毫升)		 mol/L//15KH2PO4
(毫升)
4.92
5.29
5.91
6.24
6.47
6.64
6.81
6.98		 0.10
0.50
1.00
2.00
3.00
4.00
5.00
6.00		 9.90
9.50
9.00
8.00
7.00
6.00
5.00
4.00		 7.17
7.38
7.73
8.04
8.34
8.67
8.18		 7.00
8.00
9.00
9.50
9.75
9.90
10.00		 3.00
2.00
1.00
0.50
0.25
0.10
0

Na2HPO4·2H2O分子量 = 178.05，1/15M溶液为11.876克/升。
KH2PO4分子量 = 136.09，1/15M溶液为9.078克/升。
 
8．磷酸二氢钾–氢氧化钠缓冲液（0.05M）
X毫升0.2M K2PO4 + Y毫升0.2N NaOH加水稀释至29毫升

 pH(20℃) X (毫升) Y（毫升） pH(20℃) X (毫升) Y（毫升）
5.8
6.0
6.2
6.4
6.6
6.8		 5
5
5
5
5
5		 0.372
0.570
0.860
1.260
1.780
2.365		 7.0
7.2
7.4
7.6
7.8
8.0		 5
5
5
5
5
5		 2.963
3.500
3.950
4.280
4.520
4.680

 
9．巴比妥钠-盐酸缓冲液（18℃）

pH 0.04M巴比妥钠溶液 0.2V盐酸 pH 0.04M巴比妥钠溶液(毫升) 0.2N盐酸(毫升)
6.8
7.0
7.2
7.4
7.6
7.8
8.0
8.2		 100
100
100
100
100
100
100
100		 18.4
17.8
16.7
15.3
13.4
11.47
9.39
7.21		 8.4
8.6
8.8
9.0
9.2
9.4
9.6		 100
100
100
100
100
100
100
100		 5.21
3.82
2.52
1.65
1.13
0.70
0.35

巴比妥钠盐分子量=206.18;0.04M溶液为8.25克/升
 
10．Tris–盐酸缓冲液（0.05M，25℃）
50毫升0.1M三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与X毫升0.1N盐酸混匀后，加水稀释至100毫升。

pH X(毫升) pH X(毫升)
7.10
7.20
7.30
7.40
7.50
7.60
7.70
7.80
7.90
8.00		 45.7
44.7
43.4
42.0
40.3
38.5
36.6
34.5
32.0
29.2		 8.10
8.20
8.30
8.40
8.50
8.60
8.70
8.80
8.90		 26.2
22.9
19.9
17.2
14.7
12.4
10.3
8.5
7.0

三羟甲基氨基甲烷（Tris）HOCH2    CH2OH
                               C
HOCH2    NH2
分子量=121.14;

  1. 0.       1M溶液为12.114克/升。Tris溶液可从空气中吸收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严。

 
11．硼酸–硼砂缓冲液（0.2M硼酸根）

pH 0.05M硼砂（毫升） 0.2M硼砂（毫升） pH 0.05M硼砂（毫升） 0.2M硼酸（毫升）
7.4
7.6
7.8
8.0		 1.0
1.5
2.0
3.0		 9.0
8.5
8.0
7.0		 8.2
8.4
8.7
9.0		 3.5
4.5
6.0
8.0		 6.5
5.5
4.0
2.0

硼砂Na2B4O7·H2O,分子量=381.43;0.05M溶液（=0.2M硼酸根）含19.07克/升。
硼酸H2BO3,分子量=61.84,0.2M溶液为12.37克/升。
硼砂易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。
 
11．硼酸-硼砂缓冲液（0.2M硼酸根）

pH 0.05M硼砂（毫升） 0.2M硼酸（毫升） pH 0.05M硼砂（毫升） 0.2M硼酸（毫升）
7.4
7.6
7.8
8.0		 1.0
1.5
2.0
3.0		 9.0
8.5
8.0
7.0		 8.2
8.4
8.7
9.0		 3.5
4.5
6.0
8.0		 6.5
5.5
4.0
2.0

硼砂Na2B4O7·10H2O,分子量=381.43;0.05M溶液（=0.2M硼酸根）含19.07克/升。
硼酸H2BO3，分子量=61.84, 0.2M溶液为12.37克/升。
硼砂       易失去结晶水，必须在带塞的瓶中保存。
 
12．甘氨酸–氢氧化钠缓冲液（0.05M）
X毫升0.2M甘氨酸+Y毫升0.2NnaOH加水稀释至200毫升

pH X Y pH X Y
8.6
8.8
9.0
9.2
9.4		 50
50
50
50
50		 4.0
6.0
8.8
12.0
16.8		 9.6
9.8
10.0
10.4
10.6		 50
50
50
50
50		 22.4
27.2
32.0
38.6
45.5

甘氨酸分子量=75.07;0.2M溶液含15.01克/升。
 
13．硼砂-氢氧化钠缓冲液（0.05M硼酸根）
X毫升0.05M硼砂+Y毫升0.2NNaOH加水稀释至200毫升

pH X Y pH X Y
9.3
9.4
9.6		 50
50
50		 6.0
11.0
23.0		 9.8
10.0
10.1		 50
50
50		 34.0
43.0
46.0

硼砂Na2B4O7·10H2O,分子量=381.43;0.05M溶液为19.07克/升。
 
14．碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液（0.1M）
Ca2+、Mg2+存在时不得使用

pH 0.1MNa2CO3(毫升) 0.1MN2HCO3(毫升)
20℃ 37℃
9.16
9.40
9.51
9.78
9.90
10.14
10.28
10.53
10.83		 8.77
9.12
9.40
9.50
9.72
9.90
10.08
10.28
10.57		 1
2
3
4
5
6
7
8
9		 9
8
7
6
5
4
3
2
1

Na2CO2·10H2O分子量=286.2;0.1M溶液为28.62克/升。
N2HCO3分子量=84.0;0.1M溶液为8.40克/升。
 
15．“PBS”缓冲液

PH 7.6 7.4 7.2 7.0
H2O
NaCl
Na2HPO4
NaH2PO4		 1000
8.5
2.2
0.1		 1000
8.5
2.2
0.2		 1000
8.5
2.2
0.3		 100ml
8.5g
2.2g
0.4g

 
 

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