用于常规免疫学实验

可用

单抗组合应用

抗原抗体形成格子结构（沉淀反应）

容易形成

一般难形成

抗原抗体反应

抗体混杂，形成2分子反应困难，不可逆

可形成2分子反应，可逆

[NextPage]

单克隆抗体的制备方法如下。
　　（一）动物的选择与免疫
　　1．动物的选择 　纯种BALB/C小鼠，较温顺，离窝的活动范围小，体弱，食量及排污较小，一般环境洁净的实验室均能饲养成活。目前开展杂交瘤技术的实验室多选用纯种BALA/C小鼠。
　　2．免疫方案 　　选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功，获得高质量的McAb至关重要。一般在融合前两个月左右根据确立免疫方案开始初次免疫，免疫方案应根据抗原的特性不同而定。
　　（1）可溶性抗原免疫原性较弱，一般要加佐剂，半抗原应先制备免疫原，再加佐剂。常用佐剂：福氏完全佐剂、福氏不完全佐剂。
　　初次免疫 抗原1～50μg加福氏完全佐剂皮下多点注射或脾内注射（一般0.8～1ml,0.2ml/点）
　　↓3周后
　　第二次免疫 剂量同上，加福氏不完全佐剂皮下或ip（腹腔内注射）（ip剂量不宜超过0.5ml）
　　↓3周后
　　第三次免疫 剂量同一，不加佐剂，ip（5～7天后采血测其效价）
　　↓2～3周
　　加强免疫，剂量50～500μg为宜，ip或iv（静脉内注射）
　　↓3天后
　　取脾融合
　　目前，用于可溶性抗原（特别是一些弱抗原）的免疫方案也不断有所更新，如：①将可溶性抗原颗粒化或固相化，一方面增强了抗原的免疫原性，另一方面可降低抗原的使用量。②改变抗原注入的途径，基础免疫可直接采用脾内注射。③使用细胞因子作为佐剂，提高机体的免疫应答水平，增强免疫细胞对抗原的反应性。
　　（2）颗粒抗原免疫性强，不加佐剂就可获得很好的免疫效果。以细胞性抗原为例，免疫时要求抗原量为1～2×107个细胞。
　　初次免疫 1×107/0.5ml ip
　　↓2～3周后
　　第二次免疫 1×107/0.5ml ip
　　↓3周后
　　加强免疫（融合前三天）1×107/0.5ml ip或iv
　　↓
　　取脾融合
　　（二）细胞融合
　　1．细胞融合前准备
　　（1）骨髓瘤细胞系的选择：骨髓瘤细胞应和免疫动物属于同一品系，这样杂交融合率高，也便于接种杂交瘤在同一品系小鼠腹腔内产生大量McAb。常用的骨髓瘤细胞系见表2-4。
表2-4用于融合试验的主要骨髓瘤细胞系