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实验室常用技术参数资料(5)

时间:2005-04-15 00:14来源:本站原创 作者:bioguider 阅读:
BLOTTO Grunstein-Hogness杂交
Benton-Davis杂交
除单拷贝序列Southern杂交以外的所有Southern杂交
斑点印迹
1×BLOTT(牛乳转移技术优化液,Bovine Lacto Transfer Technique Optimizer),是含5%胶脂奶粉和0.02%叠氮钠的水溶液,应保存于4℃。使用前可用预杂交液稀释25倍。BLOTTO不应与高浓度的SDS并用,因为后者会导致牛奶中蛋白质析出。如果杂交背景不合要求,可在杂交液中加入NP-40至终浓度为1%。BLOTTO不能用作Northern杂交的封闭剂,因为这一封闭剂中可能含有RNA酶,其活性之高使人无法接受。
注意:叠氮钠有毒性,取用时需戴手套小心操作。含叠氮钠的溶液应予明确标记。
肝素 Southern杂交
原位杂交
肝素(Sigma H-7005,从猪中提取的二级产品或相当等级的产品)用4×SSPE或4×SSC溶解配制成50mg/ml的浓度,保存于4℃。肝素在含有葡聚糖硫酸酯的杂交液中用作封闭剂的浓度为500μg/ml,在不含葡聚糖硫酸酯的杂交液中的浓度为50μg/ml。
经变性并被打断的鲑精DNA southern和Northern杂交
把鲑鱼精子DNA(Sigma,Ⅲ,盐钠)溶解于水配制成10mg/ml的浓度,必要时于室温磁力搅拌2~4h助溶。把溶液中NaCl的浓度调至0.1mol/L,并用酚和酚/氯仿各抽提一次,回收水相。合DNA溶液快速通17号皮下注射针头12次,以剪切DNA。加入2倍体积用冰预冷的乙醇沉淀DNA。离心回收DNA并重溶于水,配制成10mg/ml的浓度,测定溶液的OD260值并计算出精确的DNA浓度,然后煮沸10min,分装成小份保存于-20℃。使用前置沸水浴中加热5min,然后迅速在冰浴中骤冷。预杂交液中应含有100μg/ml经变性并被打断的鲑鱼精子DNA

  六、常用凝胶的技术参数

  1.葡聚糖凝胶的某些技术数据




种类


干颗粒直径(μ)


分子量分级范围

床体积毫升/克干分子筛


得水值
溶胀最少平衡时间(h)

柱头压力(kPa)(2.5cm直径柱)
肽及球形蛋白质 葡聚糖(线性分子) 室温 沸水浴
Sephadex G-10 40~ 120 ~700 ~700 2~ 3 1.0±0.1 3 1  
Sephadex G-10 40~ 120 ~1500 1500 2.5~3.5 1.5±3.5 3 1  
Sephadex G-25                

粗级

100~300

  (≈5~100目)

             

中级

50~150

  (≈100~200目)

1,000~


5,000
100~


5,000


4~6


1.5±0.2

6

2


细级

20~800(≈200~400目)              

超细

10~40              
Sephadex G-50                

粗级

100~200              

中级

50~150 1,500~ 500~          

细级

20~80 30,000 10,000 9~11 5.0±0.3 6 2

超细

10~40              
Sephadex G-75                
  40~120 3,000~ 1,000~          

超细

10~40 70,000 950,000 12~15 7.5±0.5

24

3

3.92~15.86

Sephadex G-100                
  40~120 4,000~ 1,000~          

超细

10~40 1,500,000 150,000 15~20 10.0±1.0 48 5 2.35~9.41
Sephadex G-150                
  40~120 5,000~ 1,000~ 20~30        

超细

10~40 400,000 150,000 18~22 15.0±1.5 72 5 0.88~3.53
Sephadex G-200                
  40~120 5000~ 1000~ 30~40        
  10~40 800,000 200,000 20~25 20.0±2.0 72 5 0.39~1.57

2.聚丙烯酰胺凝胶的技术数据

型号

排阻的下限

(分子量)

分级分离范围

(分子量)

膨胀后的床体积(ml/g干凝胶)

膨胀所需最少时间(室温,h)

Bio-gel-P-2 1,600 200~2,000

3.8

2~4

Bio-gel-P-4 3,600 500~4,000

5.8

2~4

Bio-gel-P-6 4,600 1,000~5,000

8.8

2~4

Bio-gel-P-10 10,000 5,000~17,000

12.4

2~4

Bio-gel-P-30 30,000 20,000~50,000

14.9

10~12

Bio-gel-P-60 60,000 30,000~70,000

19.0

10~12

Bio-gel-P-100 100,000 40,000~100,000

19.0

24

Bio-gel-P-150 150,000 50,000~150,000

24.0

24

Bio-gel-P-200 200,000 80,000~200,000

34.0

48

Bio-gel-P-300 300,000 100~400,000

40.0

48

3.琼脂糖凝胶的技术数据

型号

琼脂糖含量

%(W/W)

排阻的下限

(分子量)

分级分离的范围(分子量)

生产厂家

Sepharose 4B 4   0.3×106~3×106 Pharmacia
Sepharose 2B 2   2×106~25×106
Sagavac 10 10 2.5×105 1×104~2.5×105

Seravac
Sagavac 8 8 7×105 2.5×104~7×105
Sagavac 6 6 2×106 5×104~2×106
Sagavac 4 4 15×106 2×105~15×106
Sagavac 2 2 150×106 5×105~15×107
Bio-gel A-0.5M 10 0.5×106 <1×104~0.5×106


Bio-Rad
Bio-gel A-1.5M 8 1.5×106 <1×104~1.5×106
Bio-gel A-5M 6 5×106 1×104~5×106
Bio-gel A-15M 4 15×106 4×104~15×106
Bio-gel A-50M 2 50×106 1×105~50×106
Bio-gel A-150M 1 150×106 1×106~150×106
(责任编辑:泉水)
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