| BLOTTO | Grunstein-Hogness杂交 |
| Benton-Davis杂交 | |
| 除单拷贝序列Southern杂交以外的所有Southern杂交 | |
| 斑点印迹 | |
| 1×BLOTT（牛乳转移技术优化液，Bovine Lacto Transfer Technique Optimizer）,是含5%胶脂奶粉和0.02%叠氮钠的水溶液，应保存于4℃。使用前可用预杂交液稀释25倍。BLOTTO不应与高浓度的SDS并用，因为后者会导致牛奶中蛋白质析出。如果杂交背景不合要求，可在杂交液中加入NP-40至终浓度为1%。BLOTTO不能用作Northern杂交的封闭剂，因为这一封闭剂中可能含有RNA酶，其活性之高使人无法接受。 | |
| 注意：叠氮钠有毒性，取用时需戴手套小心操作。含叠氮钠的溶液应予明确标记。 | |
| 肝素 | Southern杂交 |
| 原位杂交 | |
| 肝素（Sigma H-7005，从猪中提取的二级产品或相当等级的产品）用4×SSPE或4×SSC溶解配制成50mg/ml的浓度，保存于4℃。肝素在含有葡聚糖硫酸酯的杂交液中用作封闭剂的浓度为500μg/ml，在不含葡聚糖硫酸酯的杂交液中的浓度为50μg/ml。 | |
| 经变性并被打断的鲑精DNA | southern和Northern杂交 |
| 把鲑鱼精子DNA（Sigma,Ⅲ,盐钠）溶解于水配制成10mg/ml的浓度，必要时于室温磁力搅拌2～4h助溶。把溶液中NaCl的浓度调至0.1mol/L，并用酚和酚/氯仿各抽提一次，回收水相。合DNA溶液快速通17号皮下注射针头12次，以剪切DNA。加入2倍体积用冰预冷的乙醇沉淀DNA。离心回收DNA并重溶于水，配制成10mg/ml的浓度，测定溶液的OD260值并计算出精确的DNA浓度，然后煮沸10min，分装成小份保存于-20℃。使用前置沸水浴中加热5min，然后迅速在冰浴中骤冷。预杂交液中应含有100μg/ml经变性并被打断的鲑鱼精子DNA | |
六、常用凝胶的技术参数
1．葡聚糖凝胶的某些技术数据
种类 |
干颗粒直径（μ） |
分子量分级范围 |
床体积毫升/克干分子筛 |
得水值 |
溶胀最少平衡时间（h） | 柱头压力（kPa）(2.5cm直径柱) | ||
| 肽及球形蛋白质 | 葡聚糖（线性分子） | 室温 | 沸水浴 | |||||
| Sephadex G-10 | 40～ 120 | ～700 | ～700 | 2～ 3 | 1.0±0.1 | 3 | 1 | |
| Sephadex G-10 | 40～ 120 | ～1500 | 1500 | 2.5～3.5 | 1.5±3.5 | 3 | 1 | |
| Sephadex G-25 | ||||||||
|
粗级 |
100～300
(≈5～100目) |
|||||||
|
中级 |
50～150
(≈100～200目) |
1,000～ 5,000 |
100～ 5,000 |
4～6 |
1.5±0.2 |
6 |
2 |
|
|
细级 |
20～800(≈200～400目) | |||||||
|
超细 |
10～40 | |||||||
| Sephadex G-50 | ||||||||
|
粗级 |
100～200 | |||||||
|
中级 |
50～150 | 1,500～ | 500～ | |||||
|
细级 |
20～80 | 30,000 | 10,000 | 9～11 | 5.0±0.3 | 6 | 2 | |
|
超细 |
10～40 | |||||||
| Sephadex G-75 | ||||||||
| 40～120 | 3,000～ | 1,000～ | ||||||
|
超细 |
10～40 | 70,000 | 950,000 | 12～15 | 7.5±0.5 |
24 |
3 |
3.92～15.86 |
| Sephadex G-100 | ||||||||
| 40～120 | 4,000～ | 1,000～ | ||||||
|
超细 |
10～40 | 1,500,000 | 150,000 | 15～20 | 10.0±1.0 | 48 | 5 | 2.35～9.41 |
| Sephadex G-150 | ||||||||
| 40～120 | 5,000～ | 1,000～ | 20～30 | |||||
|
超细 |
10～40 | 400,000 | 150,000 | 18～22 | 15.0±1.5 | 72 | 5 | 0.88～3.53 |
| Sephadex G-200 | ||||||||
| 40～120 | 5000～ | 1000～ | 30～40 | |||||
| 10～40 | 800,000 | 200,000 | 20～25 | 20.0±2.0 | 72 | 5 | 0.39～1.57 | |
2.聚丙烯酰胺凝胶的技术数据
|
型号 |
排阻的下限 (分子量) |
分级分离范围 (分子量) |
膨胀后的床体积(ml/g干凝胶) |
膨胀所需最少时间(室温,h) |
| Bio-gel-P-2 | 1,600 | 200～2,000 |
3.8 |
2～4 |
| Bio-gel-P-4 | 3,600 | 500～4,000 |
5.8 |
2～4 |
| Bio-gel-P-6 | 4,600 | 1,000～5,000 |
8.8 |
2～4 |
| Bio-gel-P-10 | 10,000 | 5,000～17,000 |
12.4 |
2～4 |
| Bio-gel-P-30 | 30,000 | 20,000～50,000 |
14.9 |
10～12 |
| Bio-gel-P-60 | 60,000 | 30,000～70,000 |
19.0 |
10～12 |
| Bio-gel-P-100 | 100,000 | 40,000～100,000 |
19.0 |
24 |
| Bio-gel-P-150 | 150,000 | 50,000~150,000 |
24.0 |
24 |
| Bio-gel-P-200 | 200,000 | 80,000～200,000 |
34.0 |
48 |
| Bio-gel-P-300 | 300,000 | 100～400,000 |
40.0 |
48 |
3．琼脂糖凝胶的技术数据
|
型号 |
琼脂糖含量 %（W/W） |
排阻的下限 （分子量） |
分级分离的范围（分子量） |
生产厂家 |
| Sepharose 4B | 4 | 0.3×106～3×106 | Pharmacia | |
| Sepharose 2B | 2 | 2×106～25×106 | ||
| Sagavac 10 | 10 | 2.5×105 | 1×104～2.5×105 | Seravac |
| Sagavac 8 | 8 | 7×105 | 2.5×104～7×105 | |
| Sagavac 6 | 6 | 2×106 | 5×104～2×106 | |
| Sagavac 4 | 4 | 15×106 | 2×105～15×106 | |
| Sagavac 2 | 2 | 150×106 | 5×105～15×107 | |
| Bio-gel A-0.5M | 10 | 0.5×106 | <1×104～0.5×106 | Bio-Rad |
| Bio-gel A-1.5M | 8 | 1.5×106 | <1×104～1.5×106 | |
| Bio-gel A-5M | 6 | 5×106 | 1×104～5×106 | |
| Bio-gel A-15M | 4 | 15×106 | 4×104～15×106 | |
| Bio-gel A-50M | 2 | 50×106 | 1×105～50×106 | |
| Bio-gel A-150M | 1 | 150×106 | 1×106～150×106 |
