重组细胞因子类药物研究的新进展(2)

      重组细胞因子类药物

      集落刺激因子（CSF）

      CSF有四种：GM-CSF、G-CSF、M-CSF和Multi-CSF，它们对造血细胞的生长分化起介导作用。在临床上，重组CSF能提高病人的耐受力，增加化疗强度和敏感性，加速骨髓移植后造血功能的恢复，因此已用于治疗肿瘤放疗和化疗后的白细胞减少、再生障碍性贫血、白血病和粒细胞缺乏症等。因CSF能增强抗原呈递细胞的免疫功能，故可利用重组人CSF基因的反转录病毒载体，转导鼠和人肿瘤细胞，通过这样的途径制作肿瘤疫苗，诱导机体产生有效的抗肿瘤免疫反应。重组CSF还被广泛用作疫苗佐剂，协助接种疫苗。但在副作用方面，重组CSF可引起轻微的发烧、寒战、恶心、呕吐、无力、头痛、肌痛和关节痛等。

      干细胞因子（SCF）

      SCF有多种重要的生理功能，是一种主要对造血细胞起重大作用的细胞因子，在自体外周血造血前体细胞的移植、放疗和化疗的辅助治疗、再生障碍性贫血等血液病的治疗及遗传性骨髓缺陷综合征的治疗方面，有良好的应用前景。在临床上，SCF可用于建立体外造血前体细胞库，如骨髓库、脐血库，并进行体外扩增。SCF对肿瘤免疫治疗中树突状细胞的扩增、基因治疗中靶细胞的扩大等也具有价值。1998年，曹诚等在大肠杆菌中高效表达了可溶形式的人SCF  Ａ，目的蛋白质占菌体总蛋白质的40％左右。表达产物复性后，经离子交换、凝胶过滤层析后测定，重组人SCF的氨基端序列及其他理化性质与天然人SCF相同，可刺激人骨髓细胞增殖，导致粒细胞-巨噬细胞集落（CFU-GM）明显增加，显示出天然SCF的生物功能活性。

      肿瘤坏死因子（TNF）

      TNF是人体内对肿瘤有直接杀伤作用的一种细胞因子，可使瘤体缩小或消失，对多种肿瘤的中晚期患者有一定治疗作用，但在临床应用中发现有明显的毒副反应，如发热、寒战、恶心呕吐、头痛、肝肾功能改变等。1980年代，许多国际机构因没有很好地解决毒副作用问题而放弃了有关重组人TNF的研制。近年来，第二军医大学在国际上首创二轮基因扩增引物法，通过哺乳动物细胞的表达，成功地获得重组人TNF。它能选择性地杀死癌细胞，毒性低、疗效高，目前已完成前期临床试验，即将作为国家一类新药广泛应用于临床。

      白细胞介素（IL）

      IL是一组介导白细胞间相互作用的细胞因子，在免疫系统中发挥重要的生理功能。自1979年第一个IL被命名后，新的IL相继被发现和克隆。近期的发现均借助计算机克隆技术，即利用商业化的EST数据库，在同源性分析的基础上进行基因克隆、细胞表达和功能分析，最终确认新的IL。这条技术路线实质上是从基因到蛋白质再到体内外功能的路线。

      五个新的正式排序的IL包括IL  19、IL  20、IL  21、IL  22和IL  23。它们目前虽未见诸临床报道，但均具备可观的药物开发前景。1999年，美国HGS公司报道了IL  19。它主要在活化的单核巨噬细胞中表达，对于抗原呈递细胞具有调节和促增殖的效应。2000年6月，美国HGS公司报道了IL  20及其受体。IL  20主要表达于脊髓、睾丸和小肠中。将重组IL  20注射入小鼠的腹腔，可明显刺激中性粒细胞的移动。2000年11月，ZymoGenetics公司发现含信号肽和跨膜区的IL  21受体。IL  21能促进骨髓NK细胞的增殖和分化，与抗CD40抗体协同刺激B细胞的增殖，与抗CD3抗体协同刺激T细胞的增殖。2000年10月，Genentech公司通过检索和测试发现IL  22。它能活化多种细胞系的STAT  1、STAT  3和STAT  5，主要表达于活化的T细胞中。该公司还通过细胞转染实验发现IL  22受体。2000年11月，DNAX研究所发现IL  23。这种分子能促使活化的T细胞增殖并产生g干扰素，还可诱导记忆性T细胞增殖。

      促红细胞生成素（EPO）

      人EPO是一种高度糖基化的蛋白质类激素样物质，主要来自肾脏，极小部分来自肝脏，能促进红细胞的生成。在临床上，EPO主要用于治疗各种贫血，对慢性肾衰性贫血起补充治疗作用，对于诸如类风湿引起的贫血也有较好的疗效。天然存在的EPO药源极为匮乏，必须从贫血病人的尿中提取，不能满足医疗需求。1985年，国外研究者成功地从胎儿肝中克隆出EPO基因，通过基因工程手段大量生产重组EPO由此成为可能。

      血小板生成素（thrombopoietin，TPO）

      TPO是一种作用于巨核细胞-血小板生成系统的造血细胞生长因子，能特异地刺激巨核细胞增殖、分化、成熟和产生血小板，从而增加血循环中的血小板数量。在临床上，TPO对血小板减少症有良好疗效，属特效药物。2003年8月，重组人TPO由沈阳三生药业完成Ⅱ、Ⅲ期临床试验，是迄今研制成功的第三个具有自主专利权的国家一类新药。复旦大学中山医院等的临床试验结果表明，该药适用于预防和治疗肿瘤化疗引起的血小板减少及原发性血小板减少症，填补了骨髓三大血细胞系中缺乏调节巨核细胞特异性药物的空白。但该药存在免疫原性强、制备成本高的缺点，仍有待改进。

      白血病抑制因子（LIF）

      LIF是一类高度糖基化的多肽细胞因子，能抑制胚胎干细胞的体外分化，维持其传代和多能性。1960年代末，曾发现一种诱导小鼠M1白血病细胞系分化为正常细胞的分化诱导因子。此因子能促进白血病M1细胞的分化，并抑制其增殖，所以被命名为白血病抑制因子（leukemia  inhibitory  factor，LIF）。在临床上，LIF与子宫内着床、急性期反应等许多过程及征象密切相关，还可抑制脂蛋白脂酶的活性，促进骨吸收，使血小板增加，刺激肝细胞合成急性反应蛋白，并参与胚胎及造血系统的发育，还能促进神经肌肉的生长并维持垂体的功能。1999年，我国研究者根据人LIF基因的cDNA序列，通过合理的引物设计、链延伸反应、PCR反应和分子克隆等步骤，成功地合成了编码成熟LIF蛋白的基因片段，并将其克隆至pUC18载体质粒上。这一成果有助于重组LIF药物的开发。 (责任编辑：泉水)

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