（一）电镜与光镜的区别
电镜与光镜的比较
电镜上述特征的功能
提高分辨率-----电子束波长很短
放大——电磁透镜可使电子偏转
空气中的分子使电子散射---高真空
电子束不可见----荧光屏
电子束成像的原理
电子束与样品的作用：
透射电子、二次电子、散射电子、x射线等
根据成像的原理与功能不同，电镜可分为两类 ： 透射电镜与扫描电镜
透射电镜与光镜光路图比较
透射电子显微镜的基本构造
电子束照明系统（电子枪、聚光镜）
电子光学系统 样品室
电磁透镜成像部分 中间镜，物镜，投影镜

机械泵
真空系统
扩散泵
高压、小电流（电子枪）
供电系统
低压、大电流（电磁透镜）
荧光屏
观察记录系统
照相装置
超薄切片技术
取材 固定 脱水 渗透 包埋 聚合 切片 电子染色
超薄切片为什么要进行电子染色？
常用的电子染色剂。

冰冻蚀刻技术
冷冻 断裂 蚀刻
喷铂 喷碳 消化
观察
扫描电镜成像原理
扫描电镜的外观
扫描电镜样品的制备
取材-----固定-----临界点干燥-------倾斜喷镀一层金膜----垂直喷镀一层碳膜 ------- 上样---观察
第二节 细胞组分分析方法
超离心技术-----细胞器与生物大分子的分离
细胞化学技术---检测细胞组分的分布
免疫技术----检测细胞的特异抗原的分布
原位杂交技术---定位特异核酸序列 的分布
放射自显影技术----可对动态过程进行定位
显微分光光度测定技术---测定细胞内特定组分的含量
流式细胞仪技术---测定、计数、分离

一、超离心技术
离心机类型：
相对离心力大小的计算
超离心技术（制备超速离心与分析超速离心）
差速离心：由低速到高速逐渐沉降分离，将不同大小的颗粒分开。
密度梯度离心：利用离心溶液所形成的密度梯度来维持重力的稳定性和抑制对流，待分离颗粒的密度在离心溶液的梯度柱密度范围内，经过一定时间离心后，不同密度的颗粒分别集中在离心溶液某密度带上而得到分离。
速度区带密度梯度离心：蔗糖介质
等密度梯度离心：氯化铯介质
差速离心与超速离心的结合
二、细胞化学技术
（一）概念：应用已知的细胞化学反应在细胞的原位上显示细胞的结构、成分和功能的技术。
（二）技术要求：1、2、3
（三）步骤：
（四）显色方法
　　化学方法 ：　孚尔根反应　　詹纳斯绿染线
粒体

　　物理方法 　：苏丹 III染脂肪滴、溴化乙锭
染DNA、考马斯亮蓝染蛋白质　

三、免疫细胞化学技术
（一）概念：利用抗体和抗原的特异性结合在细胞原位研究抗原的技术。
（二）优点（与细胞化学技术相比）
　　　特异性强、灵敏度高、定位性强
（三）免疫细胞化学常用方法
细胞的特异抗原 + 　标记的相应抗体 抗原抗体复合物
　　　　　　　　　

细胞的特异抗原
+
一级抗体（特异）　　　　 抗原一抗二抗复合物　　　　
二级抗体（通用、已标记）

抗体标记法
荧光抗体
酶标抗体
铁蛋白法
免疫胶体金法
放射性同位素标记抗体法
四、原位杂交
原位杂交：在细胞原位进行核酸杂交的定性和定位技术。
　（分子）探针的标记：
　　杂交过程：

五、放射自显影技术
原理：利用放射性同位素放射 出的射线作作于感光乳胶的卤化银晶体，从而产生潜影。再通过显影把感光的卤化银还原成黑色金属银颗粒，根据黑色的部位和黑度，来判断样品中放射性物质分布的位置和强度。
常用的放射性同位素：

放射性同位素掺入的方法:

根据标记的时间分类

制样过程
六、流式细胞仪
应用：定量、计数与不同特征细胞的分离
样品的制备：
制备分散的细胞　　染色　　细胞列队通过细胞流式仪　 　　
细胞流式仪的工作原理
光源发射激光（激发光）　　通过单个细胞　收集单个细胞发出的荧光和折射光　　电脑分析　　对该细胞充电　偏转盘调控该细胞的运动方向　分部收集
第三节、细胞工程
（一）细胞培养技术
　概述
它是指将动植物组织或细胞从机体取出，分散成单个细胞、或直接将单个细胞 给予必要的生长条件，让其在培养瓶中或培养基上继续生长与繁裂。

细胞培养的名词术语
原代培养物：　从机体，特别是从幼小的动物机体取出的组织培养而成细胞群，一般指分裂10代以内的细胞群。
原代培养：直接取自动植体的组织或细胞的培养。
传代培养：无论是否稀释，将细胞从一个培养瓶转入另一个培养瓶的培养都叫传代培养。
细胞系：来源于原代培养物和培养过程中发生突变或转化的细胞，在培养过程中可无限生长增裂的细胞群；从肿瘤组织建立的细胞群。
细胞株：通过选择法或克隆法从原代培养物或细胞系获得的具有特定性质或标志的细胞群，在培养过程中特征始终存在。
细胞克隆：从一个单一细胞通过有丝分裂而发展起来的细胞群体。
（二）细胞融合技术
概念：两个或多个细胞融合成一个双核或多核细胞的现象。
分类：自发融合与人工诱导融合
促融合剂：生物因子（仙台病毒）、化学因子（聚乙二醇）与物理因子（电融合）
同核融合细胞与异核融合细胞
单克隆抗体技术
将产生抗 体的淋巴细胞与肿瘤细胞融合，形成产生特异抗体（单克隆抗体）细胞的技术。
（三）显微操作技术
概念：
在显微镜下，用显微操作装置
对细胞进行解剖，核移植和微量注射的技术。

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显微操作过程
显微操作技术的应用

核移植
显微解剖
显微注射
小结
采用上述这些技术，可以从三个水平层次来研究细胞的形态、结构与功能，揭示细胞生命活动的规律。
第四章 质膜与细胞表面  
一、膜的概述
形态特征
生物膜
质膜
细胞内膜
内膜系统
内质网、高尔基体、溶酶体和分泌泡
线粒体
质体
过氧化物酶体
核膜
生物膜的重要功能
1 形成封闭的结构，有利于内环境的稳定
2 维持细胞内生化反应的有序性
质膜生理生化特性
对水通透性很高
脂溶性越高，通透速度越快
低的表面张力
高的电阻率
外表面带负电荷
脂溶剂和蛋白酶可破坏质膜
二、膜的化学组成

概述  
1、膜脂
组成
      磷脂（phospholipid）
     胆固醇（cholesterol）与中性脂肪
     糖脂（glycolipid）