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描述

间期阻塞是细胞同步的一种方法，通过使用Nocodazole来阻止细胞进入间期，从而实现细胞的同步化。

步骤

1. 从指数增长的细胞培养中移除培养基，并用10ml的PBS冲洗。（参见Hint #1）

2. 用含有Nocodazole的完整培养基替换PBS，并让细胞在37°C下孵育12小时。

3. 通过轻轻敲击培养皿和多次吸取培养基来去除松散附着的、圆形的有丝分裂细胞。

4. 收集含有细胞的培养基，并将其放入一个无菌的50ml聚丙烯管中，通过在1000 X g下离心10分钟来沉淀细胞。移除上清液（细胞沉淀可能很小），并将细胞在15ml的PBS中重新悬浮。

5. 在1000 X g下再次离心10分钟，并移除PBS。将细胞在完整培养基中重新悬浮，并继续实验或将细胞返回到细胞培养瓶中，在37°C下孵育。

配方

PBS pH 7.2

2.7 mM KCl

4.3 mM Sodium Phosphate Dibasic (Na2HPO4)

1.8 mM Potassium Phosphate Monobasic (KH2PO4)

137 mM NaCl

完整培养基 100 Units/ml Penicillin

100 μg/ml Streptomycin

DMEM

10% (v/v) Calf Serum

Nocodazole Stock (10,000 X) 6 g/ml in DMSO (CAUTION See Hint #2)

完整培养基含Nocodazole 100 Units/ml Penicillin

Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM)

100 μg/ml Streptomycin

10% (v/v) Calf Serum

600 ng/ml Nocodazole (从Nocodazole储备液中稀释)

提示

1. 不同的细胞株使用不同的培养基，因此“完整培养基”可能与这里描述的不同。