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背景介绍

细胞因子在调控免疫反应和细胞生长过程中扮演重要角色。通过体外实验检测细胞因子对指示细胞系增殖的影响，有助于研究细胞因子的功能及其在疾病中的作用。MTT法是一种常用的细胞增殖检测方法，能够定量分析细胞活力。

实验材料与仪器

指示细胞系（根据所用细胞因子选择，详见快速指南表）
培养基（RPMI-1640，含10%胎牛血清）
96孔平底培养板（Costar Cat. No. 3595）
MTT溶液（Sigma Cat. No. M5655，5 mg/ml，PBS溶液，避光保存）
MTT裂解液（20% SDS/50% DMF）
移液器及吸头
恒温湿润培养箱
96孔微量分光光度计

实验步骤

1. 在96孔培养板每孔加入100 μl培养基。
2. 按2倍梯度稀释样品和标准品（标准品范围详见快速指南表），从第2至第12排，第一排为空白对照。
3. 指示细胞用RPMI-1640洗涤3次，重悬于培养基，调整细胞密度至2-3.5×10⁵个/ml（详见快速指南表）。
4. 每孔加入100 μl细胞悬液。
5. 在37℃、5% CO₂湿润培养箱中孵育24-48小时（具体时间见快速指南表）。
6. 每孔加入10 μl 5 mg/ml MTT溶液，继续孵育4小时。
7. 每孔加入50 μl MTT裂解液，过夜孵育。
8. 于570-650 nm波长读取吸光度，绘制标准曲线并分析数据。

注意事项

MTT溶液需避光保存，操作过程中注意无菌操作。细胞密度和孵育时间需根据细胞系和细胞因子类型调整。

参考文献

如需进一步了解实验原理和细胞因子作用机制，建议查阅相关细胞生物学教材及最新综述。