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提高HIV-1特异性CTL检测敏感性的实验方案

本实验方案旨在通过抗原刺激外周血单核细胞(PBMC)来提高检测HIV-1特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的敏感性。刺激细胞通过感染自体B淋巴母细胞系(B-LCL)与重组痘苗病毒载体(vv)制备,该载体表达HIV-1基因产物,然后在含有补骨脂素的培养基中暴露于紫外线下,以灭活病毒和细胞RNA及DNA,同时保留抗原性。

实验步骤包括EBV转化、抗原特异性体外刺激培养、刺激PBMC以及铬释放试验等。其中,EBV转化用于获得自体EBV转化的B-LCL,抗原特异性体外刺激培养用于制备刺激细胞和刺激PBMC,铬释放试验用于检测刺激后的PBMC对HIV-1特异性CTL的杀伤活性。

实验结果通过计算每个孔的细胞毒性百分比来评估,并通过减去对照载体的细胞毒性百分比来计算HIV特异性裂解百分比。

(责任编辑:泉水)