生物行移动版

使用ELISA方法检测破伤风类毒素疫苗免疫反应是评估婴儿和儿童免疫功能的重要指标，通过比较免疫前后的特异性抗体水平来实现。

实验步骤

第一天：

5.1 将100微升/孔的破伤风类毒素包被抗原（0.4微克/毫升）涂布于96孔微孔板上。

5.2 用粘合盖覆盖板，在37摄氏度下孵育30分钟，然后在4摄氏度下过夜。

第二天：

5.3 用洗涤液洗涤三次，可以手动或使用自动板洗涤机。

5.4 添加封闭缓冲液，100微升/孔。

5.5 覆盖并在37摄氏度下孵育一小时。

5.6 用洗涤液洗涤三次，可以手动或使用自动板洗涤机。

5.7 添加样本（患者和对照血清，空白和非特异性抗体），100微升/孔，每个样本重复三次。

5.8 覆盖并在37摄氏度下孵育一小时。

5.9 用洗涤液洗涤三次，可以手动或使用自动板洗涤机。

5.10 添加HRP抗人IgG偶联物，100微升/孔。

5.11 覆盖并在37摄氏度下孵育一小时。

5.12 用洗涤液洗涤三次，可以手动或使用自动板洗涤机。

5.13 添加OPD底物溶液，100微升/孔。

5.14 在室温下避光孵育。

5.15 在450纳米处读取光密度值，分别在5、10、15和30分钟的时间点。

5.16 确定标准曲线的线性区域。

5.17 计算样本浓度。

试剂配方

4.1 包被缓冲液：0.05 M 碳酸盐-B，pH 9.6。将一个碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液片剂溶解在100毫升蒸馏水或去离子水中。可在4摄氏度下储存一周。

4.2 封闭/稀释缓冲液：0.25% BSA（牛血清白蛋白）在PBS（磷酸盐缓冲盐水）中。0.25克BSA在100毫升PBS中。现配现用。

4.4 洗涤液：0.02% Tween 20在蒸馏水或去离子水中。200微升Tween 20在1000毫升蒸馏水或去离子水中。现配现用。

4.5 破伤风包被抗原：0.4微克/毫升的康诺破伤风类毒素抗原。使用玻璃容器，将12毫克/毫升的康诺破伤风类毒素抗原原液在包被缓冲液中稀释1:30,000倍。现配现用。