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2005年6月14日

描述

我们在150 mm组织培养皿中维持3T3-L1细胞库，使用DMEM培养基（Gibco目录号11995-065），补充10%胎牛血清、100单位/ml青霉素和100 μg/mL链霉素。细胞培养每3-4天按1:5比例传代，当细胞覆盖培养皿但尚未密集生长时进行。为保持细胞快速生长和分化潜能，切勿让细胞过度生长！在适当维护下，成纤维细胞可传代至至少第12代。

步骤

培养7-8天后，细胞进入静止期，我们开始分化计划，将培养基更换为上述DMEM培养基，并补充4 μg/mL胰岛素（Sigma目录号I-5500）、115 μg/mL 3-异丁基-1-甲基黄嘌呤（Sigma目录号I-5879）和97.5 ng/mL地塞米松（Sigma目录号D-1756）。3天后，小心移除培养基，更换为含血清和抗生素的DMEM培养基。细胞开始积累脂肪滴时（通常在第4天明显），即表现出分化反应。

注意事项

分化后的细胞需要特别护理。分化后前5天内，细胞单层非常脆弱，吸液或添加培养基时容易受损。