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L.R. White树脂包埋技术在电子显微镜样品制备中的应用

树脂包埋技术相比传统石蜡包埋，能显著提升细胞结构的分辨率，因此广泛应用于肾脏疾病、淋巴瘤及骨髓穿刺等诊断领域，同时也是科研中的重要工具。

技术背景： L.R. White树脂不仅适用于光学显微镜（LM）和电子显微镜（EM）样品制备，还能用于某些耐酶性酶的组织化学示踪及细胞内免疫球蛋白的免疫组化检测。

固定步骤：

1. 使用4%多聚甲醛（或甲醛）溶液，配合或不配合2.5%蔗糖，溶于0.1M磷酸盐缓冲液（PB），pH 7.4，固定样品过夜。

2. 用0.1M PB缓冲液冲洗样品两次，每次5分钟。样品也可存放于0.2M（8%）蔗糖的0.1M PB中以便保存和运输。

脱水步骤：

1. 采用70%乙醇进行两次脱水，每次30分钟。

2. 配制L.R. White与70%乙醇的2:1混合液，缓慢滴加70%乙醇至L.R. White中，轻轻摇晃以防混浊。将样品置于该混合液中孵育1小时。

3. 将样品转移至纯L.R. White中，进行两至三次更换，每次孵育1小时，或室温下过夜孵育。必要时，样品可在4℃的L.R. White中保存数周。

包埋步骤：

1. 将样品置于明胶胶囊底部，注满L.R. White树脂至胶囊边缘，盖上胶囊盖。

2. 在60℃烘箱中聚合24至48小时完成包埋。

切片与染色：

1. 切取超薄切片，置于涂有formvar-碳膜的镍网格上，室温空气干燥过夜。

2. 进行免疫金标记，必要时需进行抗原修复（如热诱导抗原修复）。

3. 用醋酸铀染色15分钟，铅柠檬酸盐染色1-2分钟。

观察与成像：

1. 使用透射电子显微镜（TEM）观察样品超微结构。

2. 进行电子显微镜下的图像采集，记录样品细节。

总结： L.R. White树脂包埋技术因其优异的细胞结构保存能力和适用多种显微技术的灵活性，成为现代组织学和细胞生物学研究中不可或缺的工具。其温和的聚合条件有助于保持抗原性，适合免疫组化和酶组织化学的多重应用。