背景介绍
在进行淋巴组织细胞悬液的流式细胞术分析或体外功能检测前，通常需要去除红细胞以获得纯净的免疫细胞群。使用适合的裂解缓冲液可以高效裂解红细胞，同时对淋巴细胞影响最小。本文介绍了使用eBioscience公司生产的1X红细胞裂解缓冲液（产品编号：00-4333）对小鼠脾脏细胞进行裂解的标准操作流程。
裂解原理
该缓冲液主要含有氯化铵，能够选择性裂解红细胞而对淋巴细胞影响较小。对于胸腺和淋巴结等组织，通常无需进行红细胞裂解步骤，但在脾脏和外周血样本中则是必需的。
操作步骤
- 采集小鼠脾脏，制备单细胞悬液。
- 将细胞悬液离心（300-400×g），在4°C下去除上清液。
- 用5毫升裂解缓冲液重悬细胞沉淀。
- 在室温下孵育4-5分钟，期间可偶尔轻轻摇晃（也可在冰上操作以减少细胞应激）。
- 用20-30毫升1X PBS稀释裂解反应，终止裂解反应。
- 再次离心（300-400×g），在4°C下，重悬细胞于下一步实验所需缓冲液中。
- 此时进行细胞计数，为后续实验做准备。
所需材料与设备
- 1X PBS缓冲液
- eBioscience 1X红细胞裂解缓冲液（编号：00-4333）
- 50毫升锥形管
- 移液器及吸头
- 离心机
- 血细胞计数板及显微镜
实验时间
约20分钟
注意事项与技巧
- 裂解时间不宜过长，以免影响淋巴细胞的存活和功能。
- 操作过程中应保持样本在适宜温度，建议在室温或冰上进行，以确保细胞的活性和裂解效果。
- 裂解缓冲液的体积应根据样本量合理调整，通常为血液或脾脏细胞总量的10-20倍。