背景介绍：流式细胞术（FACS）是一种广泛应用于细胞分析和分选的技术，适用于酵母等微生物的细胞周期、DNA含量以及细胞状态的检测。酵母作为模式生物，其细胞周期研究对于理解真核细胞的基本机制具有重要意义。本文详细介绍了酵母细胞进行FACS分析的样本准备流程，旨在确保样本的细胞完整性和染色效果，从而获得准确的分析结果。
详细流程：
- 将1×10^7个酵母细胞离心沉淀，离心时间为1分钟，去除上清液。
- 用70%的乙醇（EtOH）重悬细胞沉淀，体积为1毫升，室温下固定至少60分钟（也可在4°C下固定数天），在旋转器上持续摇晃以确保均匀固定。这一步骤有助于细胞膜的通透性增强，便于后续染色。
- 再次离心（1分钟），将细胞沉淀重悬于50毫摩尔的柠檬酸钠缓冲液（pH 7.0）中，体积为1毫升，用于DNA染色和细胞染色的准备。
- 对细胞进行超声处理（30%的功率，持续15秒），以破碎细胞壁，随后离心沉淀，重悬于相同缓冲液中，确保细胞的均匀性和染色的效率。
- 加入核糖核酸酶A（RNase A）至浓度0.25毫克/毫升，孵育在50°C下1小时，或在37°C下过夜，以降解RNA，避免干扰DNA含量的测定。
- 再次离心沉淀，洗涤细胞，最后用柠檬酸钠缓冲液重悬，确保细胞的纯净和染色的特异性。
- 加入碘化丙啶（Propidium Iodide, PI），浓度为16微克/毫升（例如加入16微升的1毫克/毫升PI溶液），用于DNA染色。
- 在室温下孵育30分钟，使PI充分染色细胞核DNA。
- 最后进行流式细胞仪（FACS）分析，获得细胞DNA含量及细胞周期信息。
注意事项：样本固定和染色步骤的温度和时间应严格控制，以确保数据的准确性。超声处理应根据设备调节参数，避免细胞过度破碎。RNase A的酶活性和孵育条件对染色效果影响显著。
此方法基于Nash等人（1988）发表的酵母细胞DNA分析技术，已被广泛应用于酵母细胞周期研究中，为相关科研提供了可靠的技术方案。