背景介绍:吉姆萨染色法是一种常用的血液涂片染色技术,广泛应用于血液学和寄生虫学的诊断中。通过特定的染色步骤,可以清晰区分血液中的不同细胞类型以及寄生虫的形态特征,为临床诊断提供重要依据。
染色操作流程:
1. 制备涂片或细胞离心沉淀:
将血液样本制成涂片或离心沉淀,固定在甲醇中3至5分钟。
2. 染色:
将涂片放入含有1毫升Giemsa原液、2毫升pH6.4缓冲液和47毫升蒸馏水的混合液中,染色时间为40至120分钟。
3. 洗涤与封片:
用蒸馏水快速冲洗,轻轻拍干后封片。
4. 组织切片染色:
对石蜡切片,先脱蜡,依次用酒精和水冲洗,然后在含有1毫升Giemsa原液和45毫升蒸馏水的混合液中,在56°C水浴中染色20分钟至1小时。
洗净后,用稀释的醋酸(1/1500)差异染色约30秒,随即用蒸馏水冲洗,染色后应呈现整体粉红色,核呈蓝色,嗜酸性粒细胞颗粒呈红色。
最后用酒精冲洗、透明、封片。
染色效果:
- 细胞核:蓝色或紫色
- 嗜酸性粒细胞:红色
- 嗜碱性粒细胞:蓝色
- 嗜酸性粒细胞:橙红色
- 肥大细胞:紫色(颗粒)
- 寄生虫:深蓝色或暗蓝色
配方与试剂:
吉姆萨染色液:将7.36克吉姆萨粉末溶解在500毫升加热至50°C的甘油中,静置30分钟后冷却,加入500毫升甲醇,混合过滤备用。
缓冲液(索伦森缓冲液)包括:
- A:0.2M 磷酸二氢钠(分子量156),用3.12克溶于100毫升蒸馏水中。
- B:0.2M 二钠氢磷酸(分子量142),用2.83克溶于100毫升蒸馏水中。
调节pH值:
pH6.4:加入36.7毫升A和13.3毫升B,补足至100毫升。
pH6.8:加入25.5毫升A和24.5毫升B,补足至100毫升。
pH7.2:加入14.0毫升A和36.0毫升B,补足至100毫升。
注意事项:染色过程中应严格控制时间和pH值,以确保染色效果的清晰与准确。染色完成后,细胞结构和寄生虫形态能被明显区分,为临床诊断提供可靠依据。