苯丙氨酸羟化酶(PAH)基因的BglII多态性是一种遗传变异,本文介绍了检测该多态性的方法。
实验步骤
模板:基因组DNA,100-200 ng/反应体积25μl
引物1:B2PAH1,5'-GCA GGA AAC TCT CTG ACT TTG G-3',100 ng/反应
引物2:B2PAH2,5'-TGG CAG TTC TGG AGG CCA GA-3',100 ng/反应
dNTPs:终浓度200μM
缓冲液:终浓度1.5 mM MgCl2,50 mM KCl,10 mM Tris HCl pH 8.4
Taq DNA聚合酶:0.5 U/反应(Perkin-Elmer Amplitaq DNA聚合酶5 U/μl,Cat. No. N808-0145)
PCR循环程序:95℃,5分钟;95℃(30秒),60℃(30秒),72℃(30秒),30个循环
产物大小:BglII酶切后,+/+个体产生209 bp和81 bp片段