RET TaqI 多态性位于第13外显子。

实验步骤

模板：基因组DNA，50-100 ng/反应体积25 ul

引物1：RETEX13F：5'-CTC TCT GTC TGA ACT TGG GC-3'，60 ng/反应

引物2：RETEX13R：5'-TCA CCC TGC AGC AGG CCT TA-3'，60 ng/反应

dNTPs：反应中的终浓度为333 uM

缓冲液：终浓度为2.25 mM MgCl2，50 mM KCl，10 mM Tris HCl pH 8.4

BSA：终浓度为16 ug/ul

DMSO：终浓度为5%

Taq DNA聚合酶：0.75 U/反应（Perkin Elmer Amplitaq DNA聚合酶5 U/ul，Cat. No. N808-0145）

PCR循环程序：95℃，5分钟；95℃（30秒），56℃（30秒），72℃（1分钟），循环30次

产物大小：TaqI酶切后，239 bp -> 133 + 106 bp（在纯合子位点存在）

参考文献

Romeo, G., P. Ronchetto, Y. Luo, V. Barone, M. Seri, I. Ceccherini, B. Pasini, R. Bocciardi, M. Lerone, H. Kaariainen, et al., 1994. Point mutations affecting the tyrosine kinase domain of the RET proto-oncogene in Hirschsprung's disease. Nature 367:377-378.