描述

本文介绍了一种检测HOXB3基因TaqI多态性的方法。

实验步骤

使用TaqI酶切HOXB3基因的PCR扩增产物。模板：100-200 ng基因组DNA，反应体积25 μl。引物1（H2GCK3）：5'-TAT TTT TGT GAT CAA TGG AGA CC-3'，100 ng/反应；引物2（H2GCK3R）：5'-ACA GAG TCC CTC ACT GCT G-3'，100 ng/反应。dNTPs：终浓度200 μM。缓冲液：终浓度2.25 mM MgCl₂，50 mM KCl，10 mM Tris-HCl pH 8.4。Taq DNA聚合酶：0.5 U/25 μl反应体积（Perkin-Elmer Amplitaq DNA聚合酶5 U/μl，货号N808-0145）。PCR循环条件：94°C 5分钟；94°C 30秒，60°C 30秒，72°C 1分钟，共30个循环。产物大小：TaqI酶切后，316 bp片段可被切分为200 bp和116 bp两个片段（+/+个体）。

参考文献：Ogura, T., C.M. Castiglione, A.J. Pakstis, and K.K. Kidd, 1991. Two RFLPs at the HOX2G locus. Nucleic Acids Research 19:1716.