本文描述了检测ADH2基因内含子3中RsaI多态性的方法。该方法基于PCR扩增和随后的RsaI酶切分析。

实验步骤

模板：100ng基因组DNA，反应体积25μl

引物1（A2IN3DW3）：5' ATA TTT ATT TTA CCC TAA ACT TAT G 3'

引物2（A2IN3UP2）：5' GAG CTA AAA CAT ACT TTG GAT AG 3'

每种引物浓度：10μM

dNTPs终浓度：200μM

缓冲液：含2.2mM MgCl₂，50mM KCl，10mM Tris HCl pH 8.4

Taq DNA聚合酶：1单位（Perkin-Elmer Amplitaq DNA聚合酶，5u/μl，产品编号N808-0145）

PCR程序：94℃（5分钟）

94℃（40秒），59℃（30秒），72℃（1分钟），共30个循环

72℃（10分钟）

RsaI酶切前后的产物大小：

297 bp --------------> 178 bp 和 119 bp

注意：ADH2基因部分内含子3序列已在GenBank登录，编号为AF040967。多态性位点位于该GenBank记录的956位，即外显子3下游790 bp处。

本实验方案改编自Moyra Smith描述的RFLP方案（"Genetics of human alcohol and aldehyde dehydrogenases" Adv. Hum. Genet. 15:249-290, 1986）。