背景介绍

交感神经元在神经科学研究中具有重要意义，尤其在探索神经发育、功能及疾病机制方面。分离培养交感神经元是基础实验技术之一，可用于细胞生物学、药物筛选及神经信号传导等多种研究。

操作流程

1. 选用9日龄鸡胚作为实验材料。

2. 在Ham's F12培养基中解剖交感神经链。

3. 将神经节置于0.25%胰蛋白酶溶液中，37℃孵育20分钟以实现组织消化。

4. 用100%胎牛血清洗涤组织5分钟，终止胰蛋白酶作用。

5. 用Ham's F12培养基对神经链进行两次洗涤。

6. 使用火焰消毒的移液管轻柔吹打，进一步分离组织。

7. 将分离后的细胞接种于预处理（聚-DL-鸟氨酸或聚-L-赖氨酸包被）的培养皿，每皿加入1.5 ml Neurobasal或无血清F12+培养基。

8. 在培养基中添加10 ng/ml神经生长因子（NGF），促进神经元存活和生长。

F12+培养基配方

F12+培养基需补充以下成分：

• 100 μg/ml人转铁蛋白
• 1 ml青霉素/链霉素混合液（每100 ml培养基）
• 100 μM腐胺
• 20 nM孕酮
• 30 nM硒
• 5 μg/ml牛胰岛素

实验提示

建议在操作过程中保持无菌环境，细胞分离时动作要轻柔，以避免损伤神经元。培养皿预处理有助于细胞贴壁和生长。