当前位置: 主页 > 生物技术 > 分子生物学

DRD2 HincII多态性检测方法

2005-07-18 00:00 未知 未知 阅读 0
核心摘要: 本文详细介绍了DRD2基因HincII多态性的检测方法,包括引物序列、PCR反应体系和循环条件。该多态性位于DRD2基因第8外显子下游1.9 kb处,常用于神经精神疾病的遗传关联研究。

DRD2 HincII多态性是指位于多巴胺D2受体基因(DRD2)第8外显子下游1.9 kb处的一个HincII限制性内切酶位点多态性。该多态性常用于遗传关联研究,特别是在精神疾病、成瘾行为等神经精神疾病的遗传易感性分析中。

实验步骤

模板:基因组DNA 100-200 ng,反应总体积25 μL。

引物:
正向引物 D2EX8F9:5'-GAG CAA TCT TGT GCT CCA G-3',100 ng/反应;
反向引物 D2Hinc2R:5'-GGA GAA AGG TGC CTT GGA AG-3',100 ng/反应。

dNTPs:终浓度各200 μM。

缓冲液:终浓度1.5 mM MgCl2,50 mM KCl,10 mM Tris-HCl pH 8.4。

Taq DNA聚合酶:0.5 U/反应(Perkin-Elmer Amplitaq DNA聚合酶,5 U/μL,货号N808-0145)。

PCR循环条件:94°C预变性5分钟;然后94°C变性30秒,60°C退火30秒,72°C延伸1分钟,共30个循环;最后72°C延伸5分钟。

产物大小:HincII酶切后,190 bp片段被切割为140 bp和50 bp(纯合子存在酶切位点时)。

    发表评论