描述

APOB EcoRI多态性是指载脂蛋白B（APOB）基因中EcoRI限制性内切酶识别位点的遗传变异。该多态性与血脂代谢及心血管疾病风险相关。本文详细描述了通过聚合酶链式反应（PCR）结合EcoRI酶切进行基因分型的实验方法。

实验步骤

1. PCR扩增

模板：基因组DNA 100-200 ng（反应总体积25 μl）。

引物：

引物1（APOBEC1）：5'-CTG GCT TGC TAA CCT CTC TG-3'（100 ng/反应）

引物2（APOBEC2）：5'-GAG AAG CTT CCT GAA GCT CG-3'（100 ng/反应）

dNTPs：终浓度各200 μM。

缓冲液：终浓度2.25 mM MgCl₂，50 mM KCl，10 mM Tris-HCl（pH 8.4）。

Taq DNA聚合酶：0.5 U/反应（Perkin Elmer Amplitaq DNA聚合酶，5 U/μl，货号N808-0145）。

PCR循环程序：95°C预变性5分钟；95°C变性30秒，62°C退火30秒，72°C延伸30秒，共30个循环；最后72°C延伸5分钟。

2. EcoRI酶切

取PCR产物，加入EcoRI限制性内切酶，按说明书条件（通常37°C孵育1小时）进行酶切。酶切产物经琼脂糖凝胶电泳分析。

3. 结果判读

野生型（无EcoRI位点）：仅1000 bp条带。

突变纯合子（两个等位基因均含EcoRI位点）：600 bp和400 bp两条带。

杂合子：1000 bp、600 bp和400 bp三条带。

参考文献

Boerwinkle, E., S.S.Lee, R. Butler, VN Schumaker, and L. Chan, 1990. Rapid typing of apolipoprotein B DNA polymorphisms by DNA amplification. Athero 81:225-232.