PAH AluI多态性是苯丙氨酸羟化酶（PAH）基因第7外显子中的一个限制性片段长度多态性（RFLP）位点，常用于遗传连锁分析，特别是在苯丙酮尿症（PKU）的基因诊断中。该多态性通过AluI限制性内切酶消化PCR扩增产物进行检测。

实验步骤

模板：基因组DNA，100-200 ng/反应（25 μL体系）。

引物：

• 引物1（PAHALU333）：5' CTTGCACTGGTTTCCGCCTC 3'，100 ng/反应
• 引物2（PAHALU237）：5' CCCAAACCTCATTCTTGCAGCA 3'，100 ng/反应

dNTPs：终浓度200 μM each。

缓冲液：终浓度1.50 mM MgCl₂，50 mM KCl，10 mM Tris-HCl pH 8.4。

Taq DNA聚合酶：0.5 U/反应（推荐使用Perkin-Elmer Amplitaq DNA聚合酶，5 U/μL，货号N808-0145）。

PCR循环程序：95°C预变性5分钟；95°C 30秒，59°C 30秒，72°C 30秒，共30个循环；最后72°C延伸5分钟。

产物大小：PCR产物为213 bp。经AluI酶切后：

• AluI位点纯合子存在：124 bp、59 bp和30 bp片段
• AluI位点纯合子缺失：154 bp和59 bp片段
• 注：59 bp片段为恒定片段

注意事项：确保模板DNA质量良好，避免RNA污染。PCR产物需经琼脂糖凝胶电泳或聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后，用溴化乙锭或SYBR Green染色观察。