PAH PvuII B多态性是指苯丙氨酸羟化酶（PAH）基因内含子3中的一个PvuII限制性酶切位点多态性。该多态性可用于遗传连锁分析或作为遗传标记，在苯丙酮尿症（PKU）的基因诊断中具有潜在应用价值。本文详细描述了该多态性的PCR-RFLP检测方法。

实验步骤

模板：基因组DNA，100-200 ng/反应，反应体积25 μL。

引物：PAHPVUb-1（5' GCCTGAAAGCAATACAGAGG 3'）和PAHPVUb-2（5' TGAGGTAGGGATGAAAGACC 3'），各100 ng/反应。

dNTPs：终浓度200 μM each。

缓冲液：终浓度1.50 mM MgCl₂，50 mM KCl，10 mM Tris-HCl pH 8.4。

Taq DNA聚合酶：0.5 U/反应（Perkin-Elmer Amplitaq DNA聚合酶，5 U/μL，货号N808-0145）。

PCR循环程序：95°C预变性5分钟；然后95°C 30秒，58°C 30秒，72°C 30秒，共30个循环；最后72°C延伸5分钟。

产物大小：PCR产物为489 bp。经PvuII酶切后，若存在PvuII位点（纯合子），则产生259 bp和230 bp两个片段；若不存在，则保留489 bp片段。

注意事项：确保DNA质量良好，避免降解。酶切反应需充分进行，建议使用新鲜的限制性内切酶。电泳时使用2%琼脂糖凝胶，以清晰区分片段大小。