描述
NGFR（神经生长因子受体）基因的HincII多态性是一种限制性片段长度多态性（RFLP），可用于遗传关联研究。该多态性位于NGFR基因外显子1下游1695 bp处，通过HincII限制性内切酶消化PCR产物进行基因分型。

实验步骤
使用HincII限制性内切酶进行RFLP分析。PCR扩增区域位于AC006487序列的11430-12116 bp，HincII酶切位点位于11499-11504 bp。

模板
基因组DNA，每25 μl反应体系使用100-200 ng。

引物
上游引物NGFRHNCF：5'-CAC CTT TTC AGG GGG CAG C-3'，每反应100 ng。
下游引物NGFRHNCR：5'-CCC TCG TTC CAT CCC TAT TA-3'，每反应100 ng。

dNTPs
终浓度各200 μM。

缓冲液
终浓度：1.15 mM MgCl2，50 mM KCl，10 mM Tris-HCl pH 8.4，1M甜菜碱（betaine）。注意：必须添加甜菜碱。

Taq DNA聚合酶
每25 μl反应体系使用0.5单位（Perkin Elmer Amplitaq DNA聚合酶，5 U/μl，货号N808-0145）。

PCR循环程序
94°C预变性5分钟；94°C 1分钟，58°C 30秒，72°C 30秒，10个循环；94°C 30秒，58°C 30秒，72°C 30秒，25个循环；72°C延伸7分钟。

产物大小
HincII消化后：687 bp片段被切割为615 bp和72 bp（+/+纯合子）。

配方
无特殊配方。

耗材
无特殊耗材。

提示
确保甜菜碱的添加以消除GC-rich区域的二级结构，提高PCR特异性。