描述：PAH基因PvuII A多态性是指位于苯丙氨酸羟化酶（PAH）基因内含子2近5'端的一个限制性片段长度多态性（RFLP），由限制性内切酶PvuII识别。该多态性可用于遗传连锁分析，辅助苯丙酮尿症（PKU）的基因诊断。

实验步骤：

1. 模板：基因组DNA，每25 μL反应体系使用100-200 ng。

2. 引物：
- 上游引物（PAHPVU2-1）：5'-GGC ATG ACT GGA TAC GAT TAG-3'，每反应100 ng。
- 下游引物（PAHPVU2-2）：5'-CTA GAC TCA GAA TGC CTG GG-3'，每反应100 ng。

3. dNTPs：终浓度各200 μM。

4. 缓冲液：终浓度含1.50 mM MgCl₂、50 mM KCl、10 mM Tris-HCl（pH 8.4）。

5. Taq DNA聚合酶：0.5单位/反应（使用Perkin-Elmer Amplitaq DNA聚合酶，5 U/μL，货号N808-0145）。

6. PCR循环程序：
- 95°C预变性5分钟；
- 95°C变性30秒，58°C退火30秒，72°C延伸30秒，共30个循环；
- 72°C终延伸5分钟。

7. 产物大小：PvuII酶切后，野生型（+/+）个体产生374 bp片段，酶切后产生225 bp和149 bp两个片段。