Western Blot（蛋白质免疫印迹）是分子生物学和蛋白质组学中常用的实验技术。以下是一些关键经验总结，帮助提高实验成功率。

1. 封闭液的选择：脱脂奶粉（如雀巢高钙奶粉、多力精低脂奶粉）封闭效果不亚于BSA，但需注意奶粉颗粒大小，国产奶粉可能溶解不佳。推荐使用进口或速溶奶粉。

2. 转膜“三明治”组装：关键在于赶走气泡，而非剪齐边缘。现代转膜装置电极平面设计可避免短路，因此无需过度担心边缘对齐。

3. 转膜温度控制：温度应保持在10°C以下。可使用冰浴（如Pharmacia装置）或预冷冰袋（-70°C冷冻3小时以上，如Bio-Rad装置），既能降温又可节约缓冲液。

4. 转膜电流与时间：一般200-400 mA，1小时。大片段（>50 kDa）推荐350 mA，小片段可用250 mA。上述条件均能有效转印大部分蛋白。

5. 多重标记与再标记：一张膜可同时标记多个抗体，但目的蛋白分子量相差>5 kDa时，建议使用不同种属的二抗；相差<5 kDa时，需进行再标记（Re-Blot）。简易方法：ddH2O洗5分钟，0.2 M NaOH处理5分钟，ddH2O洗3次×5分钟。推荐使用坚固的PVDF膜（如Amersham Hybond-P或Hybond-Extra），本人最多在一张膜上成功标记10种不同抗体。