图21－4　钩蚴培养法

　　此法亦可用于分离人体肠道内各种阿米巴滋养体及人毛滴虫滋养体，且能提高检出率。但是，每管粪便量应为1.0g；适宜温度为25～30℃；培养时间为2～4天。临床上为了及时报告致病原虫，可于培养48小时后镜检。检查肠道各种原虫，仍应结合碘液涂片法以检出原虫包囊。

　　7．虫卵计数法　虫卵计数用于估计人体内寄生虫的感染度，常用司徒尔（Stoll）氏法，即司氏稀释虫卵计数法（图21－5）。

图21－5　　司氏虫卵计数法

图21－6　 定量板

　　用特制的三角烧瓶（或普通三角烧瓶），容量为65ml左右，在烧瓶的颈部相当于56和60ml处有两个刻度。先把0.1mol/l NaOH溶液倒入瓶内至56ml处，再慢慢地加入粪便，到液面上升到60ml处，然后放进玻璃珠10余颗，用橡胶塞塞紧瓶口，充分摇动，使其成为十分均匀的混悬液。

　　计数时充分摇匀，用有刻度的小吸管取0.075或0.15ml粪液置于载玻片上，加盖片，在低倍镜下计算全片的虫卵数。乘以200（吸0.075ml）或100（吸0.15ml）即得每克为粪便虫卵数。由于粪便的性状明显地影响估算结果，因此不成形的粪便的虫卵数应再乘粪便性状系数，即半成形粪便×1.5，软湿形粪便×2，粥状粪便×3，水泻形粪便×4。

每克粪便含卵数×24小时粪便克数　
雌虫数＝　已知雌虫每天排卵总数

成虫总数＝雌虫总数×2

　　8．定量透明法　适用于各种粪便内蠕虫卵的检查及计数。此法系应用改良聚苯乙烯作定量板（图21－6），大小为40×30×1.37mm，模孔为一长圆孔，大小为8×4mm，两端呈半圆形，所取的粪样平均为41.7mg。操作时将大小约4×4cm的100目尼龙网或金属筛网覆盖在粪便标本上，自筛网上用刮片刮取粪便，置定量板于载玻片上，用一手的两指压住定量板的两端，将刮片上的粪便填满模孔，刮去多余粪便。掀起定量板，载玻片上留下一个长形粪样，然后在粪条上覆盖含甘油－孔雀绿溶液的大小约为5.0～2.6cm的玻璃纸条，展平后加压，使玻璃纸下的粪便铺成长椭圆形。经1～2小时粪便透明后置镜下计数。将所得虫卵数×24，再乘上述粪便性状系数，即为每克粪便虫卵数（eggs 　per　gram，EPG）。常见蠕虫的每条雌虫每天排卵数如表21－2。

表21－2　各种蠕虫每条雌虫每日排卵数

　　9．淘虫检查法　为考核驱虫疗效，常需从粪便中淘取蠕虫进行鉴定与计数。取患者服药后24～72小时的全部粪便，加水搅拌，用筛（40目）或纱布滤出粪渣，经水反复冲洗后，倒在盛有清水的大型玻皿内。检查混杂在粪渣中的虫体时，应在玻皿下衬以黑纸。

　　10．带绦虫孕节检查法　绦虫节片用清水洗净，置于两载玻片之间，轻轻压平，对光观察内部结构，并根据子宫分支情况鉴定虫种。也可用注射器从孕节后端正中部插入子宫内徐徐注射炭素墨汁或卡红，待子宫分支显现后计数。

　　卡红染液配制：钾明矾饱和液100ml，卡红3g，冰醛酸10ml。混合液置于37℃温箱内过夜，过滤后即可应用。

　　（二）血液检查

　　血液检查是诊断疟疾、丝虫病的基本方法。涂制血膜用的载玻片用前需经洗涤液处理，自来水、蒸馏水冲洗，在95％酒精中浸泡，擦干或烤干后使用。

　　洗涤液配制：常用玻璃器皿的洗涤液为铬酸洗液，含工业浓硫酸100ml，重铬酸钾80g，水1000ml。先用冷水将重铬酸钾溶化，然后徐徐加入浓硫酸，同时用玻璃棒搅拌。

　　1．检查疟原虫

　　⑴取血与涂片：用75％酒精棉球消毒耳垂，待干后用左手拇指与食指捏着耳垂下方，并使耳垂下侧方皮肤绷紧，右手持取血针、刺破皮肤，挤出血滴。薄、厚血膜可涂制在同一张玻片上（图21－7）。

图21－7　薄厚血膜制作步骤

　　1）薄血膜制片：在载玻片1／3与2／3交界处蘸血一小滴，以一端缘光滑的载片为推片，将推片的一端置于血滴之前，待血液沿推片端缘扩散后，自右向左推成薄血膜。操作时两载片间的角度为30～45℃，推动速度适宜。理想的薄血膜，应是一层均匀分布的血细胞，血细胞间无空隙且涂血膜末端呈扫帚状。

　　2）厚血膜制片：载玻片的另一端（右）1／3处蘸血一小滴（约10mm³），以推片的一角，将血滴自内向外作螺旋形摊开，使之成为直径约0.8～1cm，厚薄均匀的厚血膜。厚血膜为多层血细胞的重叠，约等于20倍薄血膜的厚度。

　　⑵固定与染色：血片必须充分晾干，否则染色时容易脱落。固定时用小玻棒蘸甲醇或无水酒精在薄血膜上轻轻抹过。如薄、厚血膜在同一玻片上，须注意切勿将固定液带到厚血膜上，因厚血膜固定之前必须先进行溶血。可用滴管滴水于厚血膜上，待血膜呈灰白色时，将水倒去，晾干。在稀释各种染液和冲洗血膜时，如用缓冲液则染色效果更佳。缓冲液的配制如下：

　　磷酸氢二钠液：磷酸氢二钠（Na₂HPO₄）无水0.464g或Na₂HPO₄· 2H₂O 11.867g或Na₂HPO₄ · 7H₂O17.872g或Na₂HPO₄· 2H₂O23.877g，蒸馏水1000ml。

　　M／15磷酸二氢钾液：磷酸二氢钾（Na₂HPO₄）9.073g，蒸馏水1000ml。

　　使用时将上述原液按下页表配成不同的pH缓冲液：

　　染色时临时配成pH7.0或7.2的缓冲液。

　　常用的染色剂有姬氏染剂（Giemsa's　stain）、瑞氏染剂（Wright's 　stain）。

　　1）Giemsa染色法：此法染色效果良好，血膜褪色较慢，保存时间较久，但染色需时较长。

　　染液配制：姬氏染剂粉1g，甲醇50ml，纯甘油50ml。将姬氏染粉置于研钵中（最好用玛瑙研钵），加小量甘油充分研磨，加甘油再磨，直至50ml甘油加完为止，倒入棕色玻瓶中。然后分几次用少量甲醇冲洗钵中的甘油染粉，倒入玻瓶，直至50ml甲醇用完为止，塞紧瓶塞，充分摇匀，置65℃温箱内24小时或室温内一周过滤。

　　染色方法：用pH7.0～7.2的缓冲液，将姬氏液稀释；比例约为15～20份缓冲液加1份姬氏染液。用蜡笔划出染色范围，将稀释的姬氏染液滴于已固定的薄、厚血膜上，染色半小时（室温），再用上述缓冲液冲洗。血片晾干后镜检。

　　2）快速姬色染色法：姬氏染液1ml，加缓冲液5ml，如前法染色5分钟后用缓冲液冲洗，晾干后镜检。

　　3）Wright染色法：此法操作简便，适用于临床诊断，但甲醇蒸发甚快，掌握不当时易在血片上发生染液沉淀，并较易褪色，保存时间不长。多用于临时性检验。

　　染液配制：瑞氏染剂粉0.1～0.5g，甲醇97ml，甘油3ml。将瑞氏染剂加入甘油中充分研磨，然后加入少量甲醇，研磨后倒入瓶内，再分几次用甲醇冲洗研钵中的甘油溶液，倒入瓶内，直至用完为止，摇匀，24小时后过滤待用。一般1、2周后再过滤。

　　染色方法：瑞氏染液含甲醇，薄血膜不需先固定；而厚血膜则需先经溶血，待血膜干后才能染色。染色前先将溶过血的厚血膜和薄血膜一起用蜡笔划好染色范围，以防滴加染液时四溢。滴染液使覆盖全部厚、薄血膜上，30秒至1分钟后用滴管加等量的蒸馏水，轻轻摇动载玻片，使蒸馏水和染液混合均匀，此时出现一层灿铜色浮膜（染色），3～5分钟后用水缓慢地从玻片一端冲洗（注意勿先倒去染液或直对血膜冲洗），晾干后镜检。

　　2．检查微丝蚴

　　⑴新鲜血片检查：晚间9时至次晨2时取血1滴滴于载玻片上，加盖片，在低倍镜下观察，发现蛇形游动的幼虫后，仍须作染色检查，以确定虫种。

　　⑵厚血膜检查：厚血膜的制作、溶血、固定与姬氏液染色同疟原虫。但需取血3滴，也可用Delafieid苏木素染色法染色。该染液的配制方法如下：

　　苏木素1g溶于纯酒精或95％酒精10ml中，加饱和硫酸铝铵（8％～10％）100ml，倒入棕色瓶中，瓶口用两层纱布扎紧，在阳光下氧化2～4周，过滤，加甘油25ml和甲醇25ml，用时稀释10倍左右。

　　已溶血、固定的厚血膜在德氏苏木素液内染10～15分钟，在1％酸酒精中分色1～2分钟，蒸馏水洗涤1～5分钟，至血膜呈蓝色，再用1％伊红染色0.5～1分钟，以水洗涤2～5分钟，晾干后镜检。

　　⑶活微丝蚴浓集法：在离心管内装蒸馏水半管，加血液10～12滴，再加生理盐水混匀，离心沉淀3分钟，取沉渣检查。或取静脉血1ml，置于盛有3.8％枸橼酸钠0.1ml的试管中，摇匀，加水9ml，俟红细胞溶化后，离心（3000rpm/min）2分钟，倒去上液，加水再离心，取沉渣镜检。

　　（三）排泄物与分泌物等的检查

　　1．痰液　痰中可能查见肺吸虫卵、溶组织内阿米巴滋养体、棘球蚴的原头蚴、粪类圆线虫幼虫、蛔蚴、钩蚴、尘螨等；卡氏肺孢子虫的包囊也可出现于痰中，但检出率很低。

　　⑴肺吸虫卵检查：可先用直接涂片法检查，如为阴性，改用浓集法集卵，以提高检出率。

　　直接涂片法：在洁净载玻片上先加1～2滴生理盐水，挑取痰液少许，最好选带铁锈色的痰，涂成痰膜，加盖片镜检。如未发现肺吸虫卵，但见有夏科－雷登晶体，提示可能是肺吸虫患者，多次涂片检查为阴性者，可改用浓集法。

　　浓集法：收集24小时痰液，置于玻璃杯中，加入等量10％NaOH溶液，用玻棒搅匀后，放入37℃温箱内，数后痰液消化成稀液状。分装于数个离心管内，以1500rpm/min离心5～10分钟，充去上清液，取沉渣滴涂片检查。

　　⑵溶组织内阿米巴大滋养体检查：取新鲜痰液作涂片。天冷时应注意镜台载玻片保温。高倍镜观察。如为阿米巴滋养体，可见其伸出伪足并作定向运动。

　　⑶上述其他的蠕虫幼虫及螨类等宜用浓集法检查。

　　2．十二指肠液和胆汁　用十二指肠引流管抽取十二指肠液及胆汁，以直接涂片法镜检；也可经离心浓集后，吸取沉渣镜检。可检查蓝氏贾第鞭毛虫滋养体、华支睾吸虫卵、肝片形吸血卵和布氏姜片虫卵等；急性阿米巴肝脓肿患者偶在胆汁中发现大滋养体。