电转化是一种将外源DNA导入细菌的高效方法，尤其适用于质粒转化。以下为详细操作流程，包括感受态细胞制备、连接产物纯化、电转化及电击杯清洗。

1. 电转化感受态细胞的制备

1. 用枪头挑取单克隆菌落，投入盛有10 ml LB液体培养基的50 ml离心管中（同时做培养基和枪头的空白对照）。

2. 37℃，220 rpm，培养14-16小时。

3. 第二天，以1:100的比例将这10 ml菌液倒入1000 ml LB液体培养基中，37℃，220 rpm，振摇2-3小时，每半小时测一次OD，当OD值达到0.3-0.4时，停止培养。

4. 将菌液在冰上预冷30分钟，随后将菌液分装到500 ml预冷的离心杯中，4℃，2500 rpm离心10分钟。

5. 弃上清，离心杯中加入少量ddH2O，使沉淀悬浮后，再将水注满离心杯，4℃，4000 rpm离心10分钟。

6. 弃上清，加少量灭菌水，重悬菌体，再将水注满离心杯，4000 rpm，4℃，离心10分钟。

7. 弃上清，往离心杯中加入少量10%甘油（灭菌，预冷），重悬菌体，再加满10%甘油，4℃，4000 rpm，离心10分钟。

8. 弃上清，每个离心杯中加入5 ml 10%甘油，使沉淀悬浮后，将菌液以300 μl/管分装于1.5 ml离心管中，-80℃冰箱中保存。同时取100 μl感受态加0.01 ng puc18直接电穿孔转化，检测转化效率。

9. 次日观察转化子生长情况，并记录。

2. 连接产物纯化

1. 将连接产物转移至一1.5 ml Eppendorf管中，加入下列试剂：10 μl ddH2O，2 μl 3M NaAC（pH5.2），50 μl 无水乙醇。轻轻混匀，稍微离心并将其置于-20℃放置1小时以上。

2. 4℃，最高转速离心30分钟。

3. 小心移去上清，避免接触到管底的沉淀物。

4. 加入500 μl 70%乙醇，轻轻颠倒几次洗涤沉淀（注：不要离心混匀）。

5. 4℃，最高转速离心5分钟。

6. 小心移去上清，将此Eppendorf管置空气中直至无乙醇气味。

7. 加入10 μl ddH2O重新溶解沉淀，4℃短期保存，-20℃长期保存备用。

3. 电转化

1. 从-80℃冰箱中取出感受态细胞，置于冰上解冻。

2. 取1 μl纯化后的质粒于一1.5 ml离心管中，将其和0.1 cm的电极杯一起置于冰上预冷。

3. 将40～100 μl解冻的感受态细胞转移至此1.5 ml离心管中，小心混匀，冰上放置10分钟。

4. 打开电转仪，调至Manual，调节电压为2.1 kV。

5. 将此混合物转移至已预冷的电极杯中，轻轻敲击电极杯使混合物均匀进入电极杯的底部。

6. 将电极杯推入电转化仪，按一下pulse键，听到蜂鸣声后，向电击杯中迅速加入1000 μl的SOC液体培养基，重悬细胞后，转移到1.5 ml离心管中。

7. 37℃，220-250 rpm复苏1小时。

8. 取20 μl转化产物加160 μl SOC涂板，放于37℃温室，过夜培养，次日查看转化结果。其余菌液加1:1的30%甘油后混匀，-80℃保存。

注：每块加有Amp的平板上均匀涂有X-Gal 80 μl，SOC 80 μl，IPTG 20 μl。

4. 电击杯清洗流程

1. 用清水将电击杯稍冲一下。

2. 向电击杯中加入75%酒精浸泡2小时。

3. 弃去酒精，再用蒸馏水冲洗2-3遍，然后用1 ml的枪吸取超纯水反复吹打电击杯10遍以上。

4. 加入无水乙醇2 ml于电击杯中，浸泡30分钟。

5. 弃去无水乙醇，于通风厨内挥干乙醇。

6. 将清洗好的电击杯放入-20℃冰箱内待用。

注：1. 不同样品使用的电击杯应分开；2. 每周用1%酒精浸泡30分钟。