实验描述
信息素晕圈试验是一种用于检测酵母细胞对α-因子(一种信息素)反应的实验技术。该试验通过在含有酵母细胞的琼脂平板上放置浸有α-因子的纸盘,观察细胞生长受抑制的区域(晕圈)的大小来评估细胞对α-因子的敏感性。
实验步骤
1. 将酵母菌株在30°C下培养至饱和状态。
2. 将0.5%琼脂溶液微波加热至熔化,然后置于55°C水浴中平衡温度。
3. 将纸盘(Difco, #1599-33-6)放入无菌培养皿中,并在每个纸盘上滴加5或15μl合成的α-因子(1-5 mg/ml)。
4. 将4ml 0.5%琼脂溶液分装到带有弹出式盖的塑料管(例如Falcon, #35-2063)中。
5. 在进行试验前,将少量饱和的起始培养物转移到含有琼脂的管中。对于在SCD中培养的菌株,使用100μl起始培养物;对于在YPD中培养的菌株,使用10μl。
6. 倒置混合几次,然后倒入预热的含有适当固体培养基的平板上。轻轻旋转以均匀覆盖平板。
7. 在平板上放置一个含有5μl α-因子的纸盘和一个含有15μl α-因子的纸盘。
8. 将平板置于30°C下,直到出现细胞层。晕圈试验将导致在浸有信息素的滤纸周围出现生长抑制区域。
9. 观察并记录晕圈的大小。