线粒体DNA分离是一种用于分离和纯化线粒体DNA的实验技术。以下是实验步骤：

1. 将组织样本在研钵或Waring搅拌机中与5-7倍体积的缓冲液A混合，使用MCE浓度为350 l/L，如果必要，可以添加5 ml 1 M DIECA/L。

2. 将混合物过滤通过纱布和两层Miracloth。

3. 离心10分钟，1000 g，弃去上清液，继续离心10分钟，15900 g。

4. 将每个沉淀物在少量缓冲液G中重新悬浮，合并，调整至约10 ml/50 g或15 ml/75 g。

5. 离心10分钟，1000 g，弃去大部分上清液，轻轻摇晃沉淀物以去除松散层，合并上清液。

6. 将上清液中的MgCl2浓度调整至10 mM（100 l 1M/10 ml），添加DNase至20 g/ml（100 l 2mg/ml/10 ml）。

7. 在4°C下孵育60分钟。

8. 在底层缓冲液中添加20 ml/10-15 ml，总是使用20 ml或以上的体积。

9. 离心20分钟，12000 g，重新悬浮沉淀物在少量底层缓冲液中，调整至约10 ml/50-100 g。

10. 离心10分钟，15900 g，重新悬浮沉淀物在NN（裂解）缓冲液中（4-5 ml/50-75 g）。

11. 添加SDS至0.5%（250 l 10%/5 ml NN），充分混合。

12. 添加蛋白酶K至100 g/ml（25 l 20 mg/ml/5 ml NN），轻轻混合。

13. 在37°C下孵育60分钟。

14. 添加等体积的3:1水饱和酚，氯仿-异戊醇混合物，乳化约5分钟。

15. 离心10分钟，7000 g，收集上清液，重复步骤14和15，总共进行3次提取。

16. 最终上清液中添加0.1体积8 M氨酸乙酸，然后添加2体积的绝对乙醇。

17. 在-80°C下孵育60分钟，离心10分钟，8000-9000 g，弃去上清液，添加等体积70%乙醇，静置10分钟，离心10分钟，8000-9000 g，弃去上清液，真空干燥沉淀物30分钟。

18. 添加100-500 l 0.1X NTE，10 l RNase混合物，通常使用500 l per 50 g组织样本。

19. 在37°C下孵育30分钟。