染色体制备与荧光原位杂交（FISH）是细胞遗传学中常用的技术，用于检测DNA序列在染色体上的定位。以下是详细的实验步骤：

染色体制备

1. 薄片玻片在重铬酸中浸泡过夜。

2. 玻片在自来水下冲洗30分钟，然后用纱布在自来水下擦拭5分钟。

3. 随后，玻片在肥皂水中煮沸15分钟。

4. 冲洗后，玻片在4°C下保存1个月。

5. 固定后的淋巴细胞以1250 x g离心10分钟，然后用1-2ml新鲜固定液重悬。

6. 将7-8滴悬液滴在预冷、预清洁的玻片上，轻轻加热并用口吹以获得更好的铺展。

7. 玻片风干后，在4°C下保存1周以老化。

荧光原位杂交（FISH）

1. 根据标准细胞遗传学方法制备正常人类染色体铺片。

2. 玻片用RNase（100 μg/ml）[Sigma R-9009]在37°C湿箱中处理45分钟。

3. 玻片用PBS洗涤一次，然后用胃蛋白酶（0.008%）[Sigma P-7012]在37°C处理10分钟。

4. 玻片通过乙醇梯度（70%、85%和100%）处理，每次3分钟，然后在-20°C保存至使用。

5. 20ng标记探针DNA在含13 μl甲酰胺（68%）[Sigma F-7503]、1 μl 2X SSC（0.1X）、3 μl 10%硫酸葡聚糖（1.6%）和1 μl 10 μg/μl小牛胸腺DNA（0.52 μg/μl）[Sigma D-4522]的溶液中70°C变性5分钟。含目标染色体DNA的玻片在70%甲酰胺[Sigma F-7503]和2X SSC中70°C变性8分钟，然后在冷乙醇梯度中淬火。

6. 变性探针施加到玻片上，在37°C湿箱中杂交过夜至两天。

7. 严格洗涤：50%甲酰胺[Sigma F-7503]和2X SSC在37°C洗涤10分钟；2X SSC在37°C洗涤三次，每次4分钟；2X SSC含0.1% Nonidet P40（乙基苯基聚乙二醇）[Fluka 74385]在37°C洗涤5分钟。

8. 玻片在2.5%阻断试剂和2X SSC中室温阻断5分钟。

9. 玻片用鼠抗DIG单克隆初级抗体[Boehringer Mannheim 1333062]（40 μg/ml）在37°C湿箱中孵育45分钟。

10. 玻片用2X SSC在37°C洗涤两次，每次4分钟。

11. 玻片用兔抗鼠FITC共轭次级抗体[Zymed 62-6411]（37.5 μg/ml）在37°C湿箱中孵育30分钟。

12. 玻片用2X SSC在37°C洗涤两次，每次4分钟。

13. 玻片用丙锈碘（2 μg/ml）[Sigma P-4170]逆染色50秒，然后用水冲洗并嵌入DABCO [Sigma D-2522]抗褪色溶液中。

14. 玻片在Zeiss荧光显微镜下使用适当滤光片观察。

15. 使用Kodak 400ASA胶片，120秒曝光和光圈自动设置进行摄影。